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北京智云達(dá)科技股份有限公司

試劑盒,食品安全快速檢測(cè)儀,農(nóng)產(chǎn)品檢測(cè)儀

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產(chǎn)品展示

96孔/盒慶大霉素快檢試劑盒

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  • 北京智云達(dá)科技股份有限公司
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  • 2020-08-11 17:33:05
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【簡(jiǎn)單介紹】

慶大霉素快檢試劑盒
包含EIA測(cè)試所需試劑和標(biāo)準(zhǔn)品,可進(jìn)行96樣測(cè)試,用于牛奶、組織、血清、尿樣、蛋類、蜂蜜和飼料樣品中中慶大霉素的篩檢。

【詳細(xì)說(shuō)明】

品牌 其他品牌 是否進(jìn)口
型號(hào) ZYD

慶大霉素快檢試劑盒

慶大霉素快檢試劑盒

使用說(shuō)明書(shū)


1、原理
微孔板用羊抗兔抗體IgG包被。特異性抗體(兔抗慶大霉素),慶大霉素標(biāo)記的酶(酶結(jié)合物)和慶大霉素標(biāo)準(zhǔn)品或應(yīng)聘被加入到微孔后,特異性抗體被牢固地集合在板條上的羊抗兔抗體IgG上,同時(shí),游離的慶大霉素(在標(biāo)準(zhǔn)溶液或樣品中)和酶結(jié)合物與特異性抗體競(jìng)爭(zhēng)性結(jié)合。孵育后,在洗滌步驟中除去非結(jié)合(酶標(biāo)記)試劑。加入色原底物(四甲基聯(lián)苯胺),結(jié)合的酶結(jié)合物可將無(wú)色的色原轉(zhuǎn)化成為有色色產(chǎn)物。加入硫酸,終止底物反映,在450nm波長(zhǎng)檢測(cè)吸光值,與樣品中的慶大霉素濃度成反比。
2、產(chǎn)品簡(jiǎn)介
本試劑盒包含EIA測(cè)試所需試劑和標(biāo)準(zhǔn)品,可進(jìn)行96樣測(cè)試,用于牛奶、組織、血清、尿樣、蛋類、蜂蜜和飼料樣品中中慶大霉素的篩檢。
慶大霉素是一種氨基糖苷類抗生素。氨基糖苷類抗生素引起人類和動(dòng)物前庭功能障礙和耳聽(tīng)力損害。氨基糖苷類抗生素具有抗細(xì)菌及抗真菌作用,可用于治療革蘭氏陰性菌引起的嚴(yán)重感染,因此仍在廣泛使用。但氨基糖苷類抗生素的治療劑量及中毒劑量較為接近,其使用劑量必須收到監(jiān)控。人類在飼養(yǎng)過(guò)程中為防止奶牛間疾病的傳染、避免禽類消化器官和呼吸道疾病的爆發(fā)有意或無(wú)意使用的氨基糖苷類抗生素從而在動(dòng)物器官中產(chǎn)生了氨基糖苷類抗生素的殘留。
3、靈敏度和交叉反應(yīng)
交叉反應(yīng)
慶大霉素 100% 紫蘇霉素 20% 妥布霉素 <0.1%
新霉素 <0.1% 卡那霉素 <0.1% 林可霉素 <0.5%
靈敏度:測(cè)試曲線線性范圍0.1~-8.1ng/ml 

慶大霉素檢測(cè)試劑盒檢測(cè)下限:
樣品 處理方法 檢測(cè)下限
牛奶 脫脂稀釋 2ppb
組織 三氯yi酸提取 3ppb
血清 緩沖液稀釋 2 ppb
蛋類 緩沖液稀釋 1 ppb
蜂蜜(稀釋法) 緩沖液稀釋 3 ppb
蜂蜜(抽提法) 固相抽提 0.5 ppb
尿樣 緩沖液稀釋 2 ppb
飼料 三氯yi酸提取 2 ppb 

4、試劑盒保存
2-8℃暗處保存
使用前應(yīng)先將試劑平衡至室溫,再重組或稀釋試劑盒組分。
應(yīng)避免陽(yáng)光對(duì)色原底物溶液的直接照射。
若觀察到下列現(xiàn)象,便說(shuō)明試劑已發(fā)生降解:
色原溶液在諸如反應(yīng)孔以前變藍(lán)。
z高結(jié)合時(shí)顏色反應(yīng)微弱或缺如。(零標(biāo)準(zhǔn),E450 nm<0.8)
 
5、慶大霉素檢測(cè)試劑盒試劑盒組分
96孔酶標(biāo)版(12條*8孔)預(yù)包被抗體,無(wú)需洗滌
樣品稀釋液:20ml,50倍濃縮
洗滌緩沖液:50ml,20倍濃縮
底物溶液緩沖液A:7ml,即時(shí)可用
底物溶液B:7ml,即時(shí)可用
終止液:7ml,即時(shí)可用
酶結(jié)合物溶液:7ml,即時(shí)可用 
6瓶慶大霉素標(biāo)準(zhǔn)溶液:各1ml,濃度為0、0.1、0.3、0.9、2.7和8.1ng/ml
檢測(cè)所需設(shè)備和材料:
酶標(biāo)儀(450nm):冷凍離心機(jī);混合振蕩器;移液器;勻質(zhì)器;微量移液器(20-200ul,100-1000ul);移液器(205ml);天平、量筒、塑料檢測(cè)管、鋁箔或封口膜 

6、注意事項(xiàng)
終止溶液含硫酸,切勿接觸皮膚。
全部生物材料勻應(yīng)避免接觸皮膚和粘膜。
底物TMB在接觸皮膚和吞入時(shí)有吸入毒性,在處理此種底物時(shí)應(yīng)小心謹(jǐn)慎。
不得失效期后的試劑盒組分,也不得混合使用不同批次的組分。
各板孔z后均用于測(cè)定光學(xué)曲線,應(yīng)防止孔底內(nèi)外遭受污損。
全部組分均在使用前*溶解,應(yīng)特別注意底物,此化合物可在4℃時(shí)結(jié)晶。 

7、樣品處理
7.1 牛奶
2000g,4℃離心10min
去除上層脂肪
講脫脂奶樣用樣品稀釋液10被系數(shù),充分混勻,調(diào)ph值為7.4±0.4
吸取50ul用于檢測(cè)。
7.2 組織
取1g均質(zhì)組織樣品(肉,肝或腎),加入3ml 3%的三氯yi酸,均質(zhì)1min,顛倒混勻樣品30min;
離心(2000g,4℃ 10min);
除去上層脂肪,吸取200ul清液,加入800ul樣品稀釋液,混勻;
調(diào)整PH值到7.4±0.4;
吸取50ul用于檢測(cè)。
7.3 血清
血清用樣品稀釋液稀釋20倍后使用
吸取50ul用于檢測(cè)
7.4蜂蜜
7.4.1 緩沖液稀釋
城區(qū)1g均質(zhì)的蜂蜜樣品于塑料試管中
加4ml樣品稀釋液,渦旋混合均勻
靜置一會(huì)分層,吸取1ml上層干凈液體加到4ml樣品稀釋液中,渦旋混合均勻。
吸取50ul用于檢測(cè)
7.4.2 抽提法
1g蜂蜜樣品中加9ml抽提緩沖液
室溫下混合10min,離心(2000g,10min)
Sep-pakC18柱(water公司,05910)依次用10ml去離子水、5ml甲醇、10ml去離子水活化柱子。
將5ml樣品上清液過(guò)柱,用5ml去離子水洗滌柱子
真空干柱
用1ml甲醇洗脫
40℃ 氮硫蒸發(fā)甲醇
樣品殘留物溶于5ml樣品稀釋液
吸取50ul用于檢測(cè)
7.5 蛋類樣品
均質(zhì)后的全蛋、蛋白或蛋黃
吸取1ml均質(zhì)后的樣品到干凈試管中
加9ml樣品稀釋液,渦旋混合均勻
吸取50ul用于檢測(cè)
7.6 尿樣
將尿樣用樣品稀釋液稀釋10被倍,充分混勻,調(diào)PH值為7.4±0.4
吸取50ul用于檢測(cè)
7.7 飼料樣品
稱取1g均質(zhì)的飼料樣品,加5ml3%的三氯yi酸溶液,均質(zhì)1min,顛倒混勻樣品30min;
去掉塞子,離心 (2000g,10min)
出去上層脂肪,用過(guò)濾管吸取100ul清液(避免吸入脂肪)于塑料試管中,加入900ul樣品稀釋液后,混勻;
調(diào)整PH到7.4±0.4
吸取50ul用于檢測(cè) 

8.慶大霉素檢測(cè)試劑盒試劑制備
使用之前應(yīng)先將試劑盒回復(fù)至室溫20-25℃(提前15-30min從冰箱去除即可)
8.1 微孔板
剪開(kāi)塑料袋,取出需用數(shù)量的微孔板及框架。將不用的微孔板條放回備有干燥機(jī)的塑料袋內(nèi),密封保存于2-8℃。
8.2洗滌緩沖液(20*濃縮)
稀釋的洗滌緩沖液應(yīng)在臨用時(shí)現(xiàn)配。如:2ml濃縮的洗滌緩沖液 38ml蒸餾水
8.3 樣品稀釋緩沖液(10*濃縮)
稀釋液應(yīng)在臨用時(shí)現(xiàn)配。如:2ml濃縮的洗滌緩沖液 18ml蒸餾水
8.4 底物溶液
使用前恢復(fù)至室溫,避免陽(yáng)光直射,用前充分搖勻(底物溶液在4℃
下易結(jié)晶)。
8.5 蜂蜜抽提緩沖液
10.1g(50Mm)1-庚烷磺酸(sigmaH27660),11.4g(30mM)Na3PO4·12H2O.用去離子水定容到1升。(用Na3PO4 調(diào)PH2.0) 

9、慶大霉素檢測(cè)試劑盒檢測(cè)步驟(室溫20-25℃下操作z佳)
9.1 將所需數(shù)量的孔條插入微孔架
9.2 每孔從底部先加入50ul標(biāo)準(zhǔn)品或已處理好的樣品,再分別加入50ul酶結(jié)合物于相應(yīng)孔中
9.3封板,搖板1min
9.4 37(±1℃)孵育30min
9.5 洗版:將微滴板上端朝下倒空各孔后,再平穩(wěn)快速向下垂直甩動(dòng),并將微孔架倒置在吸水紙上拍打以除去孔中的液體。用洗滌緩沖液(300ul/孔)注入全部板孔,再次倒掉微孔中液體。重復(fù)上述操作3遍。如使用自動(dòng)洗板機(jī),可預(yù)定洗板完成5次周期。
9.6 將100ul混合后的底物溶液加入各孔。37℃暗處溫育10min。
9.7 將50ul終止液加入各孔,輕輕振蕩混勻,設(shè)定酶標(biāo)儀于450nm處(建議用雙波長(zhǎng)450nm/630nm檢測(cè)),測(cè)定每孔OD值。 

10、慶大霉素檢測(cè)試劑盒結(jié)果判定
1.計(jì)算各標(biāo)準(zhǔn)品(或樣品)的百分吸光度值,按下式計(jì)算:
標(biāo)準(zhǔn)品或樣品O.D
*100%=各標(biāo)準(zhǔn)品(或樣品)吸光度值%
零標(biāo)準(zhǔn)O.D
2.繪制以各標(biāo)準(zhǔn)品慶大霉素濃度為半對(duì)數(shù)坐標(biāo)系統(tǒng)的曲線圖,即縱坐標(biāo)標(biāo)書(shū)標(biāo)準(zhǔn)百分吸光值,橫坐標(biāo)表示各標(biāo)準(zhǔn)品慶大霉素濃度(ng/ml)的對(duì)數(shù)。在含量0.1-8.1ng/g范圍內(nèi)標(biāo)準(zhǔn)曲線應(yīng)為線性。
3.各樣品濃度可根據(jù)其百分吸光度值,從標(biāo)準(zhǔn)曲線上讀出,并乘以相應(yīng)的稀釋系數(shù).
樣品 稀釋倍數(shù) 慶大霉素的實(shí)際濃度
牛奶 10 校正曲線上讀出的濃度值*10
組織 20 校正曲線上讀出的濃度值*20
血清 20 校正曲線上讀出的濃度值*20
蛋類 10 校正曲線上讀出的濃度值*10
蜂蜜(稀釋法) 25 校正曲線上讀出的濃度值*25
蜂蜜(抽提法) 1 校正曲線上讀出的濃度值*1
尿樣 10 校正曲線上讀出的濃度值*10
飼料 50 校正曲線上讀出的濃度值*50

    
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