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在生物藥生產(chǎn)過(guò)程中，經(jīng)常會(huì)面臨細(xì)胞培養(yǎng)液表面泡沫堆積的困擾，為避免液泛跑料，需中途暫停通氣攪拌，這必然降低裝罐系數(shù)，影響發(fā)酵的效率和產(chǎn)能。當(dāng)前相對(duì)流行的做法是加入少量消泡劑，抑制泡沫生成，從而提高產(chǎn)能。

二甲基硅油是一種常見的消泡劑，為無(wú)色或淺黃色液體，無(wú)味，透明度高，具有生理惰性、良好的化學(xué)穩(wěn)定性，疏水性好，并具有很高的抗剪切能力，用作消泡劑不僅消泡迅速，且抑泡持久，添加量低，成本較小。

二甲基硅油（Simethicone）結(jié)構(gòu)

雖然二甲基硅油有上述優(yōu)點(diǎn)，但消泡劑屬于生產(chǎn)過(guò)程中引入的外來(lái)物質(zhì)，隨著藥監(jiān)部門對(duì)生物制劑監(jiān)管的不斷加強(qiáng)，作為生物制劑的生產(chǎn)企業(yè)對(duì)消泡劑殘留檢測(cè)進(jìn)行深入研究實(shí)屬必要。

檢測(cè)難點(diǎn)

1

溶解性差：

二甲基硅油化學(xué)性質(zhì)穩(wěn)定，疏水性好，不溶于水，通常溶于氯仿、二氯甲烷等有機(jī)溶劑中。因此，使用液相色譜系統(tǒng)進(jìn)行檢測(cè)時(shí)，需要液相色譜系統(tǒng)能夠兼容和耐受正相有機(jī)溶劑，對(duì)液相色譜系統(tǒng)具有很大挑戰(zhàn)；

2

無(wú)紫外吸收：

二甲基硅油本身沒(méi)有紫外吸收，無(wú)法使用紫外等需要待測(cè)物結(jié)構(gòu)中含有發(fā)色團(tuán)的檢測(cè)器進(jìn)行檢測(cè)，需要尋求其他通用型檢測(cè)手段；

3

殘留量低：

目前對(duì)于二甲基硅油等消泡劑檢測(cè)，主要為殘留檢測(cè)，對(duì)方法和檢測(cè)器靈敏度要求很高。

賽默飛解決方案

1

Vanquish Core正相色譜系統(tǒng)：

賽默飛全新推出的Vanquish Core正相色譜系統(tǒng)，能夠耐受正己烷、二氯甲烷和四氫呋喃等正相試劑，同時(shí)安裝了適用于正相系統(tǒng)的脫氣機(jī)和漏液報(bào)警裝置，能夠幫助客戶從容應(yīng)對(duì)棘手的正相色譜應(yīng)用；

2

電霧式檢測(cè)器：

賽默飛特色的通用型CAD檢測(cè)器是分析無(wú)紫外和弱紫外吸收化合物的利器，具有良好的重現(xiàn)性和高靈敏度等特點(diǎn)，在制藥與生物制藥、食品、化工及環(huán)境等方面均有廣泛應(yīng)用。

實(shí)驗(yàn)方案

1

推薦儀器配置：Vanquish Core正相色譜系統(tǒng)

泵：Quaternary Pump CN  VC-P20-A

自動(dòng)進(jìn)樣器：Split Sampler CT  VC-A12-A

柱溫箱：Column Compartment C  VC-C10-A

檢測(cè)器： Vanquish Charged Aerosol Detector VH-D20-A

色譜軟件：Chromeleon Chromatography Data System7.3

2

方案1：乙腈-二氯甲烷體系

色譜柱：Accucore C8 柱，150 × 4.6 mm，2.6 μm（P/N：17226-154630）

流動(dòng)相： A：乙腈；C：二氯甲烷；梯度洗脫

CAD：采集頻率：5 Hz，過(guò)濾常數(shù)：3.6 s，蒸發(fā)溫度：50 ℃

方案亮點(diǎn)：

利用CAD檢測(cè)器可以有效檢測(cè)實(shí)際樣品中二甲基硅油的殘留情況，線性范圍寬，靈敏度高。

3

方案2：水-乙腈-四氫呋喃體系

色譜柱：MAbPac RP 柱，2.1×100 mm，4 μm（P/N：08864730）

流動(dòng)相： A：水；B：乙腈；C：四氫呋喃；梯度洗脫

CAD檢測(cè)器：采樣頻率：5 Hz，過(guò)濾常數(shù)：3.6 s，蒸發(fā)溫度50 ℃

方案亮點(diǎn)：

通過(guò)大孔徑MAbPac RP 柱（1500 ?）結(jié)合CAD檢測(cè)器，可滿足大分子蛋白中殘留的微量二甲基硅油的監(jiān)測(cè)需求。

結(jié)論

Vanquish Core正相色譜系統(tǒng)強(qiáng)大的正相溶劑耐受能力，可以幫助客戶更靈活的應(yīng)對(duì)特殊的正相色譜應(yīng)用。同時(shí)CAD檢測(cè)器作為二甲基硅油測(cè)定的有效手段，具有靈敏度高，重復(fù)性好，線性范圍寬等優(yōu)點(diǎn)，可以幫助客戶在原輔料和工藝控制過(guò)程中消泡劑二甲基硅油的殘留提供可靠檢測(cè)。另外，賽默飛應(yīng)用團(tuán)隊(duì)也不斷推出更新、更專業(yè)、更全面的應(yīng)用方案，幫助客戶從容應(yīng)對(duì)分析工作中遇到的棘手問(wèn)題。

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