qiagen血清/血漿核酸純化試劑盒

• 無需有機(jī)提取或乙醇沉淀
• *去除污染物和抑制劑

qiagen血清/血漿核酸純化試劑盒

erformance

分析血液中腫瘤特異性的胞外DNA片段和mRNA可對(duì)普通血液樣品進(jìn)行特異性地腫瘤類型檢測(cè)。這些存在于血清或血漿中的游離核酸通常都是<1000 bp（DNA）或<1000 nt（RNA）的片段。此外，小至21 nt的miRNAs可作為某些癌癥和疾病狀態(tài)的生物標(biāo)記。

QIAamp Circulating Nucleic Acid Kit可從人類血漿、血清和其他無細(xì)胞體液中高效純化游離核酸。純化效率高、重現(xiàn)性好、產(chǎn)量高（參見"Reproducible recovery of circulating DNA"）。應(yīng)用延長(zhǎng)的上樣管和真空裝置QIAvac 24 Plus可將樣品處理量提至5 ml，洗脫體積可在20–150 μl之間靈活變化，可濃縮低濃度核酸。 該試劑盒采用*的技術(shù)，硅膠膜選擇性的結(jié)合目標(biāo)核酸，提高片段化核酸的回收率（參見"Improved recovery of fragmented DNA"）。

使用RNase-Free DNase Set進(jìn)行DNA柱上消化，純化獲得不含DNA的游離RNA 。特別設(shè)計(jì)的流程確保高效純化諸如miRNA等小RNA（參見"Efficient purification of circulating miRNA"）。使用QIAamp Circulating Nucleic Acid Kit高效純化甲基化DNA，經(jīng)純化的DNA維持其甲基化狀態(tài)，可進(jìn)行亞硫酸氫鹽轉(zhuǎn)化實(shí)驗(yàn)，進(jìn)行甲基化狀態(tài)分析（參見"Efficient recovery of methylated DNA"）。

經(jīng)純化和濃縮的游離DNA和RNA不含蛋白、核酸酶和其他雜質(zhì)，可即用于各種下游應(yīng)用，包括：

PCR 和定量real-time PCR以及RT-PCR

用于基于血液樣品的癌癥生物標(biāo)記的研究、驗(yàn)證和檢測(cè)

病毒核酸檢測(cè) 

回收游離DNA。

在24個(gè)血漿樣本中加入同等量的DNA片段（200 bp和1000 bp）。使用QIAamp Circulating Nucleic Acid Kit從5 ml血漿中純化DNA，洗脫體積為80 μl。使用QuantiTect Multiplex PCR Kit對(duì)每個(gè)DNA片段特異性的66 bp靶點(diǎn)進(jìn)行雙重real-time PCR，定量DNA的產(chǎn)量。

回收片段化DNA，表現(xiàn)更出色。

使用QIAamp Circulating Nucleic Acid Kit從5 ml血漿中純化游離DNA，或者使用QIAamp MinElute Virus Vacuum Kit從200 μl血漿中純化游離DNA，洗脫體積為100 μl。使用QuantTect Multiplex PCR Kit對(duì)18S rRNA基因內(nèi)的66 bp擴(kuò)增片段和500 bp擴(kuò)增片段進(jìn)行雙重real-time PCR，定量DNA的產(chǎn)量。500 bp擴(kuò)增片段和66 bp擴(kuò)增片段的擴(kuò)增差異顯示DNA被片段化，從而導(dǎo)致完整的500 bp目標(biāo)序列的豐度低于較短的66 bp靶點(diǎn)。（請(qǐng)注意差異大于五倍樣本輸入體積差異）。

高效純化游離miRNA。

使用QIAamp Circulating Nucleic Acid Kit從4 ml采集血漿中純化游離DNA，洗脫體積為50 μl。將標(biāo)準(zhǔn)試劑盒實(shí)驗(yàn)方案與適用于miRNA的實(shí)驗(yàn)方案進(jìn)行比較。使用TaqMan microRNA Assay（Applied Biosystems）定量miRNA 30b的產(chǎn)量，使用Human miScript Assay（QIAGEN）定量miRNA 16的產(chǎn)量。采用miRNA實(shí)驗(yàn)方案獲得的CT值較低，表示miRNA的產(chǎn)量更高。

高效回收甲基化DNA。

使用QIAamp Circulating Nucleic Acid Kit從4 ml血漿中純化加入的甲基化DNA和非目標(biāo)poly-A RNA，洗脫體積為45 μl。使用EpiTect Bisulfite Kit（QIAGEN）進(jìn)行亞硫酸氫鹽轉(zhuǎn)化，使用real-time MSP分析和QuantiTect Multiplex PCR Kit組分在ABI PRISM 7900HT Sequence Detection System上進(jìn)行甲基化特異性PCR（MSP）。對(duì)兩個(gè)全甲基化位點(diǎn)數(shù)據(jù)進(jìn)行分析。