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帶型 | 原因分析 | 解決辦法 |
弱帶或無帶 | 上樣的DNA量不夠 | 增加DNA的上樣量,聚丙烯酰胺凝膠電泳比瓊脂糖電泳靈敏度稍高 |
DNA降解 | 避免DNA的核酸酶污染 | |
電泳時間過長,DNA跑出 | 減短電泳時間,降低電壓,增強凝膠濃度 | |
EB染色的DNA,紫外光源不合適 | 應(yīng)用短波長(254nm),增強紫外燈靈敏度 | |
DNA帶缺失 | 小DNA帶走出凝膠 | 減短電泳時間,降低電壓,增強凝膠濃度 |
分子大小相近的DNA帶不易分辨 | 增加電泳時間,核準(zhǔn)正確的凝膠濃度 | |
DNA 變性 | 電泳前請勿高溫加熱DNA鏈,以20mM NaCl Buffer稀釋DNA | |
巨大DNA鏈,凝膠電泳不合適 | 在脈沖凝膠電泳上分析 | |
DNA帶模糊 | DNA降解 | 避免核酸酶污染 |
DNA上樣量過多 | 減少凝膠中DNA上樣量 | |
所用電泳條件不合適 | 電泳時電壓不應(yīng)超過20V/cm,溫度<30℃,巨大DNA鏈,溫度應(yīng)<15℃,核查所用電泳緩沖液是否有足夠的緩沖能力 | |
DNA樣含鹽過高 | 電泳前通過乙醇沉淀去除過多的鹽 | |
有蛋白污染 | 電泳前酚抽提去除蛋白 | |
DNA變性 | 電泳前勿加熱,用20mM NaCl緩沖液稀釋DNA | |
不規(guī)則DNA帶遷移 | 對于λ/Hind III片段COS位點復(fù)性 | 電泳前加熱DNA 65℃加熱5-10分鐘,然后在冰上冷卻5分鐘 |
電泳條件不合適 | 電泳電壓不超過20V/cm,溫度<30℃,電泳緩沖液有足夠的緩沖能力 | |
DNA變性 | 以20mM NaCl Buffer稀釋DNA,電泳前勿加熱 |
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