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流式細(xì)胞術(shù)同型對照如何選擇抗體？

來源：武漢艾美捷科技有限公司 2021年02月23日 16:54 1286

流式細(xì)胞術(shù)（Flow Cytometry，FCM）是一種對液流中排成單列的細(xì)胞或其它生物微粒（如微球，細(xì)菌，小型模式生物等）逐個進(jìn)行快速定量分析和分選的技術(shù)。

一、為什么要用同型對照？

同型對照是使用與一抗相同種屬來源、相同亞型、相同劑量和相同的免疫球蛋白及亞型的免疫球蛋白，用于消除由于抗體非特異性與細(xì)胞結(jié)合而產(chǎn)生的背景染色。同型對照是真正意思上的陰性對照，它不但可以用來設(shè)定流式細(xì)胞儀的電壓，而且還可以幫忙省去昂貴與繁瑣的重組細(xì)胞因子競爭封閉步驟。

二、如何選擇同型對照？

分析流式結(jié)果時，不能因為得到了熒光信號就判斷細(xì)胞表面肯定結(jié)合有相應(yīng)的熒光素，從而得出細(xì)胞表達(dá)相應(yīng)的抗原分子的結(jié)論，而應(yīng)該比較該熒光信號與細(xì)胞的非特異性熒光，如果得到的熒光信號大于非特異性熒光，說明得到的熒光信號部分來源于熒光素的特異性熒光，就可以得出細(xì)胞表達(dá)相應(yīng)的抗原分子的結(jié)論。

所以，確定與熒光素?zé)o關(guān)的細(xì)胞自身的非特異性類光的強弱非常重要，而設(shè)立陰性對照就是為了確定細(xì)胞的非特異性熒光。

看看以下3類艾美捷整理的陰性對照流式分析比較全面的陰性對照：

第1類“negative”表示的是不加任何熒光素偶聯(lián)抗體時得到的熒光信號，因為沒有標(biāo)記任何類光素，所以這組得到的熒光信號與熒光素?zé)o關(guān)，與細(xì)胞抗原分子CD69是否表達(dá)無關(guān)，得到的熒光信號代表的是非特異性熒光信號；

第2類“抗CD69”表示的是用抗CD69抗體標(biāo)記樣品細(xì)胞后得到的類光信號，雖然抗CD69抗體能修與細(xì)胞表面的CD69抗原分子結(jié)合，但是抗CD9抗體沒有偶聯(lián)熒光素，所以得到的熒光信號也與細(xì)胞表面是否表達(dá)有CD69分子無關(guān)，得到的熒光信號代表的也只是細(xì)胞本身的非特異性熒光信號，這種對照用于排除抗體的干擾；

第3類“IgG1-PE”表示的是標(biāo)記與抗CD69抗體同種屬（來源于同一物種）且同類（抗CD69-PE中的抗體IgG1類的）的非特異性抗體（IgG1）與PE熒光素偶聯(lián)的同型（isotype）對照抗體（IgG1-PE）后，得到的熒光信號，這種就屬于同型對照，其不能與細(xì)胞表面的CD69發(fā)生特異性結(jié)合，所以細(xì)胞表面不會結(jié)合有IgG1-PE，得到的熒光信號是代表細(xì)胞本身的非特異性熒光，不屬于PE熒光素產(chǎn)生的特異性熒光信號，這種同型對照用于排除熒光素的干擾。

以上3種陰性對照，并不用全部設(shè)置齊全，一般只需要設(shè)置1種陰性對照就可以，其中第3種同型對照是常規(guī)的陰性對照設(shè)置法。

艾美捷EXBIO作為流式研發(fā)專家，可為您提供流式同型對照抗體：

宿主	同型對照	貨號	名稱	應(yīng)用
小鼠	IgG1	11-457-C100	Mouse IgG1 Isotype Control，無標(biāo)記	FC (QC tested), IP, IHC(P), IHC(F), ICC, WB, ELISA
	IgG1 kappa	11-632-C100	Mouse IgG1 Isotype Control，無標(biāo)記	FC (QC tested), IP, WB, IHC(P), IHC(F), ICC, ELISA
		12-632-C100	Mouse IgG1 Isotype Control 無標(biāo)記，低內(nèi)毒素	FC (QC tested), IP, WB, IHC(P), IHC(F), ICC, ELISA, FUNC
		1A-632-C100	Mouse IgG1 Isotype Control，APC標(biāo)記	FC (QC tested)
		1B-632-C100	Mouse IgG1 Isotype Control，*標(biāo)記	WB, ELISA, IHC(F), ICC, IHC(P), IP, FC (QC tested)
		1F-632-C100	Mouse IgG1 Isotype Control，F(xiàn)ITC標(biāo)記	FC (QC tested)
		1P-632-C100	Mouse IgG1 Isotype Control，PE標(biāo)記	FC (QC tested)
		A4-632-C100	Mouse IgG1 Isotype Control，Alexa Fluor 488標(biāo)記	IHC(P), FC (QC tested), ICC, IHC(F), WB
		A6-632-C100	Mouse IgG1 Isotype Control，Alexa Fluor 647標(biāo)記	FC (QC tested), IHC(P), IHC(F), ICC, WB
		A7-632-C100	Mouse IgG1 Isotype Control，Alexa Fluor 700標(biāo)記	FC (QC tested)
	IgG2a	11-458-C100	Mouse IgG2a Isotype Control，無標(biāo)記	FC (QC tested), IP, IHC(P), IHC(F), ICC, WB, ELISA
	Mouse IgG2a kappa	1A-724-C100	Mouse IgG2a Isotype Control，APC標(biāo)記	FC (QC tested)
		1P-724-C100	Mouse IgG2a Isotype Control，PE標(biāo)記	FC (QC tested)
		PC-724-C100	Mouse IgG2a Isotype Control，PerCP標(biāo)記	FC (QC tested)
	IgG2b	11-801-C100	Mouse IgG2b Isotype Control，無標(biāo)記	FC (QC tested), IP, IHC(P), IHC(F), ICC, WB, ELISA
	IgG2b kappa	1A-692-C100	Mouse IgG2b Isotype Control，APC標(biāo)記	FC (QC tested)
		1B-692-C100	Mouse IgG2b Isotype Control，*標(biāo)記	WB, ELISA, ICC, IHC(F), IHC(P), IP, FC (QC tested)
		1F-692-C100	Mouse IgG2b Isotype Control，F(xiàn)ITC標(biāo)記	FC (QC tested)
	IgG3	11-459-C100	Mouse IgG3 Isotype Control ，無標(biāo)記	FC (QC tested), IP, IHC(P), IHC(F), ICC, WB, ELISA
		L4-459-C100	Mouse IgG3 Isotype Control，DyLight 488	FC (QC tested), IHC(P), IHC(F), ICC, WB
		L6-459-C100	Mouse IgG3 Isotype Control，DyLight 650	FC (QC tested), IHC(P), IHC(F), ICC, WB
	IgM	11-803-C100	Mouse IgM Isotype Control ，無標(biāo)記	FC (QC tested), IP, IHC(P), IHC(F), ICC, WB, ELISA
		1F-803-C100	Mouse IgM Isotype Control，F(xiàn)ITC標(biāo)記	FC (QC tested)
		1P-803-C100	Mouse IgM Isotype Control，PE標(biāo)記	FC (QC tested)
		L4-803-C100	Mouse IgM Isotype Control，DyLight488標(biāo)記	FC (QC tested), IHC(P), IHC(F), ICC, WB
大鼠	IgG2a	11-168-C100	Rat IgG2a Isotype Control ，無標(biāo)記	FC (QC tested), IP, IHC(P), IHC(F), ICC, WB, ELISA
		12-168-C100	Rat IgG2a Isotype Control ，低內(nèi)毒素	IHC(P), FC (QC tested), ELISA, IP, IHC(F), ICC, WB, FUNC
		1A-168-C100	Rat IgG2a Isotype Control，APC標(biāo)記	FC (QC tested)
		1P-168-C100	Rat IgG2a Isotype Control，PE標(biāo)記	FC (QC tested)
	IgG2b	11-169-C100	Rat IgG2b Isotype Control ，無標(biāo)記	FC (QC tested), IP, IHC(P), IHC(F), ICC, WB, ELISA
		12-169-C100	Rat IgG2b Isotype Control，低內(nèi)毒素	IHC(P), FC (QC tested), ELISA, IHC(F), IP, ICC, WB, FUNC
		1F-169-C100	Rat IgG2b Isotype Control，F(xiàn)ITC標(biāo)記	FC (QC tested)

以下熒光標(biāo)記同型對照抗體案例展示：

使用小鼠IgG3同種型對照（PPV-07）DyLight®650抗體（樣品中濃度為5ug/ ml）對人外周血進(jìn)行的流式細(xì)胞儀表面非特異性染色模式。

文章來源：艾美捷科技

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