離子色譜采用DNAPac PA100陰離子交換核酸分離柱,在梯度淋洗條件下可實(shí)現(xiàn)C、A、T、G四種脫氧核苷酸與常見4種主要雜質(zhì)(懷疑為C、A、T、G四種核苷酸)的良好分離,分離度可達(dá)到1.5以上,峰形對(duì)稱度在0.83-1.15之間,而理論塔板數(shù)均能高于5000。此外,方法還具有常規(guī)柱*的優(yōu)勢(shì),能同時(shí)分離小分子堿基,離子色譜單分子核苷酸還有聚核苷酸,參見譜圖中3min以前的峰和16 min以后的出峰。離子色譜柱上得到的峰形相比傳統(tǒng)液相柱得到的更為尖銳,因此靈敏度相對(duì)高,10 μL進(jìn)樣時(shí)即可達(dá)到0.5 mg/L以下的檢出限。
離子色譜多點(diǎn)校正操作規(guī)程
1. 配置標(biāo)準(zhǔn)曲線:將各個(gè)標(biāo)準(zhǔn)樣品按照濃度由低到高的順序一次進(jìn) 樣,同時(shí)在各樣品的“定量組份”中輸入各組分的套峰時(shí)間、組 分名稱及濃度,同時(shí)在“定量方法”中選擇“標(biāo)準(zhǔn)樣品(計(jì)算校 正因子)”,譜圖出完后停止采集信號(hào)并保存。
2. 離子色譜檢測(cè)樣品:將樣品依次進(jìn)樣,譜圖出完后停止采集信號(hào)并保存。 (注:每更換一種樣品,都需要用去離子水將進(jìn)樣口清洗三次)
3. 制作標(biāo)準(zhǔn)曲線:將標(biāo)準(zhǔn)曲線的譜圖全部打開,然后按照一定次序分別單擊各譜圖的“定量結(jié)果”中的“當(dāng)前表存檔”并確定,就 將各譜圖存檔了,然后單擊 “定量方法”中“工作曲線”里的 “計(jì) 算”按鈕,則標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算成功,此時(shí)可以在“顯示”中看各組 分的標(biāo)準(zhǔn)曲線。
4. 計(jì)算樣品:將樣品譜圖打開,離子色譜在“定量方法”中選擇“多點(diǎn)校正 (基于工作曲線)”,然后單擊“工作曲線”中的“計(jì)算”按鈕, 然后再單擊工具欄中的“計(jì)算”按鈕,此時(shí)“定量結(jié)果”中就會(huì) 顯示樣品中各組分的濃度。
5. 生成報(bào)告:樣品計(jì)算完成后,單擊工具欄中的“打印”按鈕,就 會(huì)以寫字板的形式生成報(bào)告,然后打印報(bào)告,檢測(cè)完畢。
離子色譜的一體化、人性化設(shè)計(jì)讓儀器使用起來更簡(jiǎn)單,增強(qiáng)人機(jī)互動(dòng),讓使用者隨時(shí)了解儀器的運(yùn)行狀態(tài)。離子色譜儀凝結(jié)了多位科研人員的智慧結(jié)晶我們將會(huì)繼續(xù)努力,向著更專業(yè)化的道路邁進(jìn)。
優(yōu)化的檢測(cè)系統(tǒng)功能齊全,可獲得*可靠的結(jié)果,根據(jù)用戶需要,配置不同的檢測(cè)系統(tǒng),實(shí)現(xiàn)儀器多功能化。
離子色譜儀使用及維護(hù)
1、流動(dòng)相瓶中濾頭要注意始終處于液面以下,防止將溶液吸干。
2、啟動(dòng)泵前觀察從流動(dòng)相瓶到泵之間的管路中是否有氣泡,如果有則應(yīng)將其排除。
離子色譜排除方法如下:先將與泵相連的塑料流路接頭擰下來,用洗耳球吸滿去離子水,從與泵段相連的流路管中注入,將流路管中的氣泡排除干凈。然后再將流動(dòng)相瓶(一般為去離子水瓶)抬高,再將流路接頭與泵連接好。離子色譜啟動(dòng)泵,打開泵內(nèi)排氣閥選鈕,將泵內(nèi)氣泡排除干凈,一般觀察為流出液比較均勻,再將泵排氣閥擰緊。(注意:此項(xiàng)操作時(shí),整個(gè)流路是與色譜柱斷開的)