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上海金鵬分析儀器有限公司

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如何分析電泳

閱讀：48發(fā)布時間：2024-10-6

那么下面上海金鵬分析儀器有限公司為大家簡單介紹一下關(guān)于如何分析電泳:

在凝膠電泳儀中，DNA或蛋白質(zhì)樣品的分離（通?；诖笮。┦峭ㄟ^施加電場使它們遷移通過凝膠來分離的。凝膠電泳在生物醫(yī)學(xué)研究實驗室中是常規(guī)操作，可用于回答各種不同的問題，因此，實際上并沒有一種通用的方法來分析結(jié)果。
例如，諸如蛋白質(zhì)印跡，RNA印跡和DNA印跡的不同技術(shù)都涉及凝膠電泳。
如果您要進行DNA樣品的瓊脂糖凝膠電泳（常見的一種方法），通常需要至少做兩件事：1）區(qū)分未切割的質(zhì)粒與插入片段，帶切口的質(zhì)粒和切割的質(zhì)粒，以及2）估計使用標(biāo)準(zhǔn)曲線Excel或計算器計算各種DNA片段的大小。
運作方式如下。
檢查您的實驗室筆記本以確定哪些樣品已裝入哪些通道。當(dāng)裝載凝膠孔時，您應(yīng)該注意每個泳道/樣品的身份。
確定哪個泳道包含DNA標(biāo)準(zhǔn)的“階梯”。這些是已知長度的片段。它們的遷移距離可用于通過標(biāo)準(zhǔn)曲線Excel或其他計算器確定樣品片段的大小。
用尺子測量從孔到跟蹤染料的圖像距離，該染料比任何DNA條帶都行進的距離遠（換句話說，它將位于凝膠的底部）。記錄此數(shù)字-您使用的單位并不重要。
測量照片上從孔到“階梯”中每個帶的距離，然后用該距離除以跟蹤染料帶所經(jīng)過的距離。此計算為您提供每個頻段的相對遷移率。
示例：假設(shè)跟蹤染料帶移動了6英寸，而我們有三個帶移動了5、4.5和3.5英寸。
他們的相對流動性是什么？答：我們將5、4.5和3.5除以6得到的相對遷移率分別為0.833、0.75和0.5833。
將相對遷移率輸入到電子表格程序（Excel或您使用的任何其他類似程序）中，并將階梯中每個片段的大小（以千堿基為單位）一起輸入。
制造商會為您提供他們提供的梯子中每個碎片的大小，因此您應(yīng)該已經(jīng)有了此信息。
在x上繪制具有相對移動性的數(shù)據(jù)，在y上繪制以千為單位的大小的數(shù)據(jù)。
在電子表格程序上使用趨勢線函數(shù)將方程擬合到數(shù)據(jù)中。該方程式應(yīng)為冪方程式（例如x ^ -2），并且應(yīng)相對較好地擬合數(shù)據(jù)（R系數(shù)至少為0.9）。這將創(chuàng)建一條曲線和一個標(biāo)準(zhǔn)曲線Excel。
查看與您的樣本相對應(yīng)的譜帶。
請記住，較小的DNA片段比較大的DNA片段穿過凝膠的距離更遠，因此靠近跟蹤染料的片段將小。但是請注意，如果未切割質(zhì)粒（環(huán)狀）DNA，它將像電話線一樣“超螺旋”或扭曲，這實際上會使它比相同大小的線性DNA傳播得更遠。
同樣，未切割的“切口”質(zhì)粒將比相同大小的線性DNA傳播更短的距離。因此，您無法從凝膠中估計未切割質(zhì)粒的大小。
將每個泳道中的條帶與您在該泳道中加載的樣品的標(biāo)識相匹配，并確定您所看到的是否是您所期望的。這將取決于實驗的性質(zhì)。
但是，一般來說，如果您用兩種限制性酶消化插入質(zhì)粒，則可以預(yù)期該插入物中將沒有質(zhì)粒。
由于它比質(zhì)粒小得多，您可能會在該泳道中看到兩條帶，一條靠近頂部，而另一條靠近底部。僅用一種限制酶切割的質(zhì)粒應(yīng)僅形成一條條帶，該條帶比用兩種限制酶切割的質(zhì)粒行進的距離要遠一些，但不能遠至插入片段。
測量從孔到切出的質(zhì)粒的距離，并用尺子插入條帶。將這些數(shù)字除以跟蹤染料的行進距離，即可得出插入片段和切割質(zhì)粒的相對遷移率。
將插入片段和剪切質(zhì)粒的相對遷移率插入電子表格程序為您計算的方程式中。這種計算應(yīng)給您估計這些質(zhì)粒的大小。

以上就是上海金鵬分析儀器有限公司為大家整理總結(jié)關(guān)于如何分析電泳。

我們上海金鵬分析儀器有限公司是專業(yè)生產(chǎn)超微量核酸蛋白測定儀、化學(xué)發(fā)光成像系統(tǒng)、凝膠成像分析系統(tǒng)、紫外分析儀、核酸蛋白檢測儀、紫外檢測儀、蛋白質(zhì)分離純化系統(tǒng)、光化學(xué)反應(yīng)儀、旋渦混合器、恒流泵、自動部分收集器等十幾個系列產(chǎn)品的廠家，歡迎大家前來訂購

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