*灌裝系統(tǒng)一般由*、進(jìn)樣器、色譜柱、檢測器、數(shù)據(jù)記錄及處理裝置等組成。其中*、色譜柱、檢測器是關(guān)鍵部件。有的儀器還有梯度洗脫裝置、在線脫氣機(jī)、自動進(jìn)樣器、預(yù)柱或保護(hù)柱、柱溫控制器等,現(xiàn)代HPLC儀還有微機(jī)控制系統(tǒng),進(jìn)行自動化儀器控制和數(shù)據(jù)處理。制備型HPLC儀還備有自動餾分收集裝置。
*的液缸容積小,可至0.1ml,因此易于清洗和更換流動相,特別適合于再循環(huán)和梯度洗脫;改變電機(jī)轉(zhuǎn)速能方便地調(diào)節(jié)流量,流量不受柱阻影響;泵壓可達(dá)400 kg/cm2。其主要缺點(diǎn)是輸出的脈沖性較大,現(xiàn)多采用雙泵系統(tǒng)來克服。雙泵按連接方式可分為并聯(lián)式和串聯(lián)式,一般說來并聯(lián)泵的流量重現(xiàn)性較好(RSD為0.1%左右,串聯(lián)泵為0.2~0.3%),但出故障的機(jī)會較多(因多一單向閥),價(jià)格也較貴。*是*灌裝系統(tǒng)中zui重要的部件之一。泵的性能好壞直接影響到整個(gè)系統(tǒng)的質(zhì)量和分析結(jié)果的可靠性。*應(yīng)具備如下性能:①流量穩(wěn)定,其RSD應(yīng)<0.5%,這對定性定量的準(zhǔn)確性至關(guān)重要;②流量范圍寬,分析型應(yīng)在0.1~10 ml/min范圍內(nèi)連續(xù)可調(diào),制備型應(yīng)能達(dá)到100 ml/min;③輸出壓力高,一般應(yīng)能達(dá)到150~300 kg/cm2;④液缸容積小;⑤密封性能好,耐腐蝕。
zui早的*灌裝系統(tǒng)由粗糙的高壓泵、低效的柱、固定波長的檢測器、繪圖儀,繪出的峰是通過手工測量計(jì)算峰面積。后來的高壓泵精度很高并可編程進(jìn)行梯度洗脫,柱填料從單一品種發(fā)展至幾百種類型,檢測器從單波長至可變波長檢測器、可得三維色譜圖的二極管陣列檢測器、可確證物質(zhì)結(jié)構(gòu)的質(zhì)譜檢測器。*灌裝系統(tǒng)數(shù)據(jù)處理不再用繪圖儀,逐漸取而代之的是zui簡單的積分儀、計(jì)算機(jī)、工作站及網(wǎng)絡(luò)處理系統(tǒng)。
*灌裝系統(tǒng)工作時(shí)要留心防止溶劑瓶內(nèi)的流動相被用完,否則空泵運(yùn)轉(zhuǎn)也會磨損柱塞、缸體或密封環(huán),zui終產(chǎn)生漏液。*的工作壓力決不要超過規(guī)定的zui高壓力,否則會使高壓密封環(huán)變形,產(chǎn)生漏液。流動相應(yīng)該先脫氣,以免在泵內(nèi)產(chǎn)生氣泡,影響流量的穩(wěn)定性,如果有大量氣泡,*灌裝系統(tǒng)就無法正常工作。
*灌裝系統(tǒng)要注意溶劑的互溶性,不相混溶的溶劑不能用作梯度洗脫的流動相。有些溶劑在一定比例內(nèi)混溶,超出范圍后就不互溶,使用時(shí)更要引起注意。當(dāng)有機(jī)溶劑和緩沖液混合時(shí),還可能析出鹽的晶體,尤其使用磷酸鹽時(shí)需特別小心。梯度洗脫所用的溶劑純度要求更高,以保證良好的重現(xiàn)性。進(jìn)行樣品分析前必須進(jìn)行空白梯度洗脫,以辨認(rèn)溶劑雜質(zhì)峰,因?yàn)槿跞軇┲械碾s質(zhì)富集在色譜柱頭后會被強(qiáng)溶劑洗脫下來。*灌裝系統(tǒng)用于梯度洗脫的溶劑需*脫氣,以防止混合時(shí)產(chǎn)生氣泡。