濟(jì)南海博實(shí)驗(yàn)室儀器有限公司
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GL-6型銅綠假單胞菌檢測 （濾膜法）水樣過濾裝置為本公司自主產(chǎn)品，整體采用食品級不銹鋼制作，六聯(lián)式，做5個(gè)水樣批次時(shí)其中一聯(lián)可關(guān)閉（每聯(lián)都配有開關(guān)閥門）根據(jù)國標(biāo)GB8538-2016要求，濾床可高溫滅菌，根據(jù)經(jīng)驗(yàn)，我們配置的是循環(huán)水式抽水裝置，負(fù)壓可達(dá)-0.098Mpa，真空度好，并配有2500ml水樣緩沖瓶，6個(gè)水樣一次完成，水樣過濾裝置整體做工考究，堅(jiān)固耐用，也可用于其他無菌檢測過濾用，性價(jià)比好。
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HBLG-6型水樣過濾器
濟(jì)南海博LG-6型水樣過濾器單價(jià)為5000元
GL-6型銅綠假單胞菌檢測 （濾膜法）水樣過濾裝置為本公司自主產(chǎn)品，整體采用食品級不銹鋼制作，六聯(lián)式，做5個(gè)水樣批次時(shí)其中一聯(lián)可關(guān)閉（每聯(lián)都配有開關(guān)閥門）根據(jù)國標(biāo)GB8538-2016要求，濾床可高溫滅菌，根據(jù)經(jīng)驗(yàn)，我們配置的是循環(huán)水式抽水裝置，負(fù)壓可達(dá)-0.098Mpa，真空度好，并配有2500ml水樣緩沖瓶，6個(gè)水樣一次完成，水樣過濾裝置整體做工考究，堅(jiān)固耐用，也可用于其他無菌檢測過濾用，性價(jià)比好。
GB8538-2016 銅綠假單胞菌檢測操作步驟（部分）
水樣過濾在100級的潔凈工作臺進(jìn)行過濾操作。首先用無菌鑷子夾取滅菌濾膜邊緣部分,將粗糙面向上,貼放在已滅菌的濾床上,固定好濾器,將250mL水樣或稀釋液通過孔徑0.45μm 的濾膜過濾,然后將過濾后的濾膜貼在已制備好的CN 瓊脂平板上,平鋪并避免在濾膜和培養(yǎng)基之間夾留著氣泡。
培養(yǎng)將平板倒置于36℃±1℃培養(yǎng)24h~48h,并防止干燥。
結(jié)果觀察
在培養(yǎng)20h~24h和40h~48h后觀察濾膜上菌落的生長情況并計(jì)數(shù)。
計(jì)數(shù)所有顯藍(lán)色或綠色(綠膿色素)疑似銅綠假單胞菌的菌落,并進(jìn)行綠膿菌素確證性試驗(yàn)。
在紫外線下檢查濾膜時(shí),應(yīng)避免長時(shí)間在紫外光下照射,否則可能會(huì)將平板上的菌落殺滅,而導(dǎo)致無法在證實(shí)培養(yǎng)基上生長。計(jì)數(shù)濾膜上所有發(fā)熒光不產(chǎn)綠膿色素疑似銅綠假單胞菌菌落,并進(jìn)行乙酰胺肉湯確證性試驗(yàn)。
將其他所有紅褐色不發(fā)熒光的菌落進(jìn)行氧化酶測試、乙酰胺液體培養(yǎng)基、金氏B培養(yǎng)基確證性試驗(yàn),培養(yǎng)20h~24h觀察結(jié)果,防止因?yàn)榕囵B(yǎng)40h~48h導(dǎo)致菌落過分生長而出現(xiàn)菌落融合。
最終的銅綠假單胞菌菌落計(jì)數(shù)應(yīng)按GB8538-2016國家標(biāo)準(zhǔn)中57.6中式(128)進(jìn)行計(jì)算。
在CN 瓊脂上生長的菌擇和驗(yàn)證步驟見GB8538-2016國家標(biāo)準(zhǔn)中表31。
檢測中所需培養(yǎng)箱、培養(yǎng)基、100級潔凈工作臺，356nm紫外檢查燈及各種常規(guī)實(shí)驗(yàn)器具本公司均有售。
本產(chǎn)品也可用于GB8538-2016國標(biāo)中第55項(xiàng)大腸菌群檢測中的第二法（濾膜法）的水樣過濾以下是GB8538-2016國家標(biāo)準(zhǔn)中55項(xiàng)大腸菌群檢測中的第二法（濾膜法）的部分檢測步驟
用滅菌鑷子夾取滅菌濾膜邊緣部分,將粗糙面向上,貼放在已滅菌的濾床上,固定好濾器,將100mL水樣(如水樣含菌數(shù)
較多,可減少過濾水樣量,或?qū)⑺畼酉♂?注入濾器中,打開濾器閥門,在-5.07×104 Pa(負(fù)0.5大氣壓)下抽濾。
水樣濾完后,再抽氣約5s,關(guān)上濾器閥門,取下濾器,用滅菌鑷子夾取濾膜邊緣部分,移放在品紅亞硫酸鈉培養(yǎng)基上,濾膜
截留細(xì)菌面向上,濾膜應(yīng)與培養(yǎng)基貼緊,兩者間不得留有氣泡,然后將平皿倒置,放入36℃±1℃恒溫箱內(nèi)培養(yǎng)24h
±2h。
觀察濾膜上面的菌落特征。大腸菌群典型菌落在遠(yuǎn)藤培養(yǎng)基上具有以下特征:
a) 紫紅色,具有金屬光澤的菌落;
b) 深紅色,不帶或略帶金屬光澤的菌落;
c) 淡紅色,中心色較深的菌落;
d) 挑取不少于3個(gè)(不足3個(gè)則全挑)可疑菌落,進(jìn)行革蘭氏染色鏡檢觀察。
凡系革蘭氏陰性無芽孢桿菌,再接種乳糖蛋白胨培養(yǎng)液,經(jīng)36℃±1℃培養(yǎng)24h±2h后,如產(chǎn)酸產(chǎn)氣則判定為大腸菌群陽性。
結(jié)果與報(bào)告
濾膜上的大腸菌群菌落數(shù)按式(127)計(jì)算,以每100mL水樣中的大腸菌群數(shù)報(bào)告結(jié)果:
每100mL水中大腸菌群菌落數(shù)(CFU/100mL)=確證為大腸菌群菌落數(shù)(CFU)×100 過濾的試樣量(mL)
國標(biāo)GB8538-2016 部分
操作步驟推測性檢驗(yàn)
①水樣過濾
應(yīng)根據(jù)水質(zhì)污染情況確定水樣的稀釋倍數(shù),以濾過一張無菌濾膜后能產(chǎn)生20個(gè)~100個(gè)菌落為宜,每張濾膜過濾250
mL水樣或稀釋液在100級的潔凈工作臺進(jìn)行過濾操作。首先用無菌鑷子夾取滅菌濾膜邊緣部分,將粗糙面向上,貼放在已滅菌的濾床上,固定好濾器,濾膜經(jīng)過濾后應(yīng)直接轉(zhuǎn)移到KF鏈球菌瓊脂培養(yǎng)基上,同時(shí)避免在濾膜和培養(yǎng)基之間夾留著氣泡。
②培養(yǎng):
將培養(yǎng)皿倒置,在36℃±1℃培養(yǎng)48h。
③計(jì)數(shù):
糞鏈球菌菌落在濾膜上呈現(xiàn)大小不等的紅色或粉紅色菌落。挑取不少于5個(gè)(不足5個(gè)則全挑)可疑菌落,進(jìn)行革蘭氏染色。鏡檢觀察,糞鏈球菌應(yīng)為革蘭氏染色陽性球菌,常排列成短鏈狀。根據(jù)菌落特征符合情況計(jì)數(shù)每250mL水樣中的典型菌落數(shù)。
④確證性試驗(yàn)：
從濾膜上挑取典型的菌落,接種到腦-心浸萃瓊脂培養(yǎng)基斜面上,在36 ℃±1 ℃培養(yǎng)24h~48h。如果有菌落生長,則繼續(xù)按56.5.2.2和56.5.2.3的步驟進(jìn)行。
56.5.2.2 用接種環(huán)從腦-心浸萃瓊脂培養(yǎng)基斜面上挑取典型培養(yǎng)物到一片清潔的載玻片上,加幾滴新鮮配制的3%過氧化氫到載玻片的涂抹菌苔上,如果沒有氣泡發(fā)生,則顯示過氧化氫酶反應(yīng)為陰性,則菌落可視為可疑糞鏈球菌,需繼續(xù)如下的確信過程。
如果有氣泡發(fā)生,則過氧化氫酶反應(yīng)為陽性,因此菌落不屬于糞鏈球菌,確信試驗(yàn)到此即可停止。用接種環(huán)從腦-心浸萃瓊脂培養(yǎng)基上轉(zhuǎn)移一環(huán)培養(yǎng)物到腦-心浸萃液態(tài)培養(yǎng)基內(nèi),在45 ℃培養(yǎng)48h。
此外,也同時(shí)轉(zhuǎn)移一環(huán)培養(yǎng)物到膽汁液態(tài)培養(yǎng)基中,在36℃±1℃培養(yǎng)3d。膽汁液態(tài)培養(yǎng)基由40mL無菌的100g/L牛膽鹽溶液加入60mL無菌的腦-心浸萃液態(tài)培養(yǎng)基中配制而成。轉(zhuǎn)移到上述培養(yǎng)基后,若能夠生長繁殖,則結(jié)果表示為陽性,證實(shí)為糞鏈球菌。
結(jié)果與報(bào)告
根據(jù)上述典型菌落的計(jì)數(shù)(56.5.1.3)和確證性試驗(yàn)為陽性的結(jié)果(56.5.2),計(jì)算每250mL水樣中的糞鏈球菌數(shù)量,結(jié)果以CFU/250mL計(jì)。
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