慶大-霉素酶聯(lián)免疫試劑盒
貨號：Ounuo99002
一、藥物概述及檢測原理
本試劑盒利用慶大-霉素抗體與慶大-霉素可產(chǎn)生特異性結(jié)合的性質(zhì)，先在酶標板上預包被抗原，再加入標準品（樣本）和慶大-霉素抗體，慶大-霉素藥物與固定在酶標板上的抗原競爭慶大-霉素抗體，最后加入底物催化顯色。
二、試劑盒內(nèi)包含組分
v 準品工作液：0ppb、0.1ppb、0.3ppb、0.9ppb、2.7ppb，1mL/瓶。
v 96孔酶標板：1塊
v 11x濃縮酶標記物：1瓶（0.7mL/瓶）
v 酶標記物稀釋液：1 瓶（7mL/瓶）
v 20×濃縮洗滌液：1瓶（30 mL/瓶）
v 4×濃縮復溶液：1瓶（30 mL/瓶）
v 底物A液：1瓶（7 mL/瓶）
v 底物B液：1瓶（7 mL/瓶）
v 終止液：1瓶（7mL）
v 說明書
v 蓋板膜
v 自封袋
三、需要自備的設(shè)備和試劑
（1）儀器：
v 酶標儀（檢測波長450nm、630nm）
v 電子天平（精度：0.01 g）
v 離心機（4000g及以上）
v 生化培養(yǎng)箱（可調(diào)25℃）
v 旋渦振蕩器
v 微量移液器：（20μL-200μL、100μL-1000μL各一支、30-300μL八道排槍）
v 計時器
（2）試劑：（試劑均為分析純）
v 甲醇
v 氯化鈉
v 氯化-鉀
v 磷酸二氫鉀
v 氫氧化鈉
v 十二水合磷酸-氫二鈉
v 去離子水
四、樣本檢測步驟
1. 工作液準備
v 復溶工作液：取1份4×濃縮復溶液加去離子水3份按照1:3的比例稀釋即得。
v 洗滌工作液：取1份20×濃縮洗滌液加去離子水19份按照1:19的比例稀釋即得。
v PBS緩沖液: 0.1M PBS溶液(PH=10-11) 稱取13.4g十二水合磷酸-氫二鈉.20g氯化鈉.0.32g氫氧化鈉.0.5g磷酸二氫鉀.0.5g氯-化鉀加去離子水溶解定溶至500ml。
v 0.1M碳酸鹽緩沖液（pH=10.6）：稱取4.66g無水-碳酸鈉和0.5g碳酸-氫鈉加入500ml去離子水溶解混勻。
v 1%三氯-乙酸溶液：稱取5.0g三氯乙-酸加入500mL 去離子水溶解混勻。
v 1moL/L氫氧化鈉:稱取4g氫氧化鈉加入100mL充分溶解混勻。
2. 樣品前處理
（1）組織樣本方法 （雞肉、豬肉）(稀釋倍數(shù)：20倍)
v 稱取 1.0±0.05g 樣本至10mL聚苯乙烯離心管中，加入3 mLPBS緩沖液（見配液5.1）,上下顛倒振搖5min。
v 放入60℃水浴環(huán)境中60min 后，取出4000g 以上，
室溫離心5min；
v 移取100μL上清液至2ml聚苯乙烯離心管中，加入400μL復溶工作液（見配液 5.1），用渦旋儀渦動
1min;
v 取50 μl 用于分析。
（2）肝臟樣本方法 (稀釋倍數(shù)：40)
v 稱取 1.0±0.05g 均質(zhì)物至 50mL 聚苯乙烯離心管中，加入 1.5 mL 0.1M 碳酸鹽緩沖液（見配液 5.1）和 1.5mL 甲醇；
v 用渦旋儀渦動 2min， 3000g 以上， 室溫離心5min；
v 移取100μL上清液至2ml聚苯乙烯離心管中，加入900μL復溶工作液（見配液 5.1），用渦旋儀渦動1min;
v 取 50 μL 用于分析。
（3）液態(tài)奶方法（稀釋倍數(shù)：20）
v 移取1mL牛奶樣本至2ml聚苯乙烯離心管中， 加入1mL1%三氯-乙酸（見配液 5.1） ，用渦旋儀渦動3min，
v 3000g以上，室溫離心5min；
v 移取50μL上清液至2mL聚苯乙烯離心管中，加入450 μL復溶工作液（見配液5.1），用渦旋儀渦動1min;
v 取 50μL 用于分析。
（4）血清方法（稀釋倍數(shù)20）
v 取50μL血清至2ml聚苯乙烯離心管中，加入950μL復溶工作液（見配液5.1），用渦旋儀渦動1min;
v 取 50μL 用于分析。
（5）雞蛋方法（稀釋倍數(shù)30倍）
v 稱取 1.0±0.05g 均質(zhì)后的雞蛋樣本至 10ml 聚苯乙烯離心管中，2.0mL 甲醇，在加入50μL 1moL/L氫氧化鈉；
v 用渦旋儀渦動 2min， 3000g 以上， 室溫離心5min；
v 移取50μL上清液至2ml聚苯乙烯離心管中，加入450μl復溶工作液（見配液 5.1），用渦旋儀渦動1min;
v 取 50 μL 用于分析。
3. 檢測
? 準備：將要使用的酶標板條插入酶標板架上，并記錄各標準品和樣品的位置，為減小檢測值波動建議做雙孔平行實驗（每個樣本/標準品點兩孔），未使用的酶標板條用自封袋密封后，保存于2-8℃環(huán)境中以防變質(zhì)；
? 加樣：向?qū)⒖字屑尤霕藴势饭ぷ饕?span>/樣品溶液50 μL；
? 酶標記物工作液配制：取1份11X濃縮酶標記物加10份酶標記物稀釋液按照1:10的比例稀釋即得。（注：請務(wù)必按需現(xiàn)混現(xiàn)用！）
? 向每孔中加入50 μL酶標記物工作液；孵育：輕輕振蕩酶標板10 s，使孔內(nèi)液體充分混勻后，蓋好蓋板膜于25℃避光反應30min；
? 洗滌：取出酶標板后小心揭開蓋板膜，倒出板孔中液體后，在每孔加250μL洗滌工作液，浸泡15-30s后倒掉洗滌工作液，然后再加入洗滌工作液重復洗滌3~4次后，將酶標板倒置于吸水紙上，用力拍干；
? 顯色：在每孔中加入100μL 底物A和底物B的混合液（注：底物A液、底物B液必須按體積1:1充分混合，混合液在10 min內(nèi)使用，切不可使用金屬容器盛裝、攪拌試劑以免底物變質(zhì)失效）；
? 孵育：輕輕振蕩酶標板15 s，使孔內(nèi)液體充分混勻后，蓋好蓋板膜于25℃避光反應15min；
? 終止：在反應后的微孔中加入終止液50μL/孔，底物液由藍變黃表明終止成功。
? 讀數(shù)：終止后的酶標板應在5 min內(nèi)用酶標儀讀數(shù)，建議使用450nm、630nm雙波長讀取酶標板吸光度值。
4. 計算結(jié)果
? 設(shè)各標準品（或樣品）的吸光度平均值為B，零標準（濃度為0 ppb的標準品）吸光度平均值B0以(B/B0)×100為各標準品（或樣品）對應的吸光度的百分比：
? 使用半對數(shù)系統(tǒng)代入標準品對應的吸光度的百分比，與標準品濃度擬合出標準曲線。
? 將待檢樣品吸光度的百分比代入擬合出的標準曲線方程中，即可得出樣品對應的濃度，最后乘以樣品相應的稀釋倍數(shù)，即可得出樣品中檢測物含量。
五、 試劑盒參數(shù)
? 試劑盒靈敏度：0.1 ppb；
? 標準曲線范圍：0.1 ppb-2.7 ppb；
? 板內(nèi)變異系數(shù)：<5%；
? 板間變異系數(shù)：<15%；
? B0吸光度值：>0.8；
? 回收率：90%±15%
? 試劑盒與其他藥物的交叉反應率：
慶大-霉素………………………………………100.0
? 樣品檢測限：
肝臟、雞蛋……………………………約10 ppb
組織……………………………………約6 ppb
血清……………………………………約6 ppb
液態(tài)奶………………………………約15 ppb
注：ppb=ng/mL或ng/g。
六、 分析限制
本試劑盒為定量或半定量試劑盒，建議用于大量樣本篩查分析。若檢測結(jié)果為陽性，建議使用儀器方法開展確證實驗（如GC/MS、LC-MS/MS等）。
七、 試劑盒貯存條件
? 試劑盒貯存溫度為2-8℃，切勿凍存。
? 未使用完的酶標板須密封保存2-8℃的環(huán)境中。
八、 注意事項
? 使用試劑盒前，請務(wù)必仔細閱讀說明書。
? 試劑盒使用前，需將盒內(nèi)各組份置于實驗臺上回溫至室溫（25±2℃）（提示：約1 h）。
? 試劑使用前需搖勻，混合時應避免出現(xiàn)氣泡。
? 槍頭為一次性用品，為防止試劑交叉污染，檢測過程中所用槍頭不得重復使用。
? 請勿使用過期試劑盒，不同批號試劑盒中的試劑不得混用。
? 樣品處理完畢后請立即分析，否則可能影響檢測結(jié)果。
? 底物A液、底物B液均為無色透明液體，若在使用前已變成藍色，或混合后立即變藍，說明試劑已污染或變質(zhì)。
? 加樣過程在保證精度的前提下一定要迅速，以免反應時間差對檢測結(jié)果產(chǎn)生影響。
? 終止液中含有硫酸，若不小心濺上皮膚或衣物請立即用大量清水沖洗。
