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人體間期細胞X—小體的制備
點擊次數(shù)：1006 發(fā)布時間：2010-7-5
一、原理
1949年Barr等發(fā)現(xiàn)，在雌性體細胞中的兩條X染色體有一條（或這條的大部分）處于凝集不活動狀態(tài)，從而形成X-小體（或稱X-染色質(zhì)、性染色質(zhì)、Barr小體）。進而發(fā)現(xiàn)，所有哺乳類雌體細胞中都有一條這種表現(xiàn)的X染色體，當在個用雌或雄體中，有多于2條X染色體時，在間期細胞內(nèi)除一條外，其余均形成X-小體。
人類正常的男女體細胞中，22對常染色體并無區(qū)別，但其性染色體分別為XY和XX。女性的兩條X染色體中，有一條在間期呈現(xiàn)濃縮狀態(tài)，可由適當?shù)娜玖巷@示。正常女性間期細胞中X小體陽性率約為30—50%。
二、儀器、用品及試劑
光學顯微鏡，恒溫水浴箱；
牙簽、載玻片、染色缸；
Carnoy固定液（甲醇∶冰乙酸＝3∶l）70%乙醇，硫堇染液；
5N HCl，0.2%甲苯胺蘭染液。
三、操作步驟
（一）方法一
l．取材、涂片：取女性口腔上皮細胞均勻涂布在潔凈載玻片上。
2．固定：涂片后立即95％乙醇中固定30分鐘（不可干燥）。氣干。
3．染色：玻片在蒸餾水中沖洗幾次后5N HCl（22℃）水解10分鐘，蒸餾水洗去多余HCl，硫堇染色30分鐘。水洗。
4．鏡檢、氣干后即可鏡檢。若背景顏色過深可在75%乙醇、95%乙醇中分色后再鏡檢。
（二）方法二
l．取女性口腔上皮細胞涂片。待干燥。
2．Carnoy固定液中固定15分鐘。干燥。
3．5N HCl中10分鐘。水洗。干燥。
4．0.2%甲苯胺蘭染色2—5分鐘。水洗。氣干。
5．鏡檢。
四、注意事項
l．涂片時應(yīng)均勻涂成單層，取材細胞要多些。取材前應(yīng)漱口。
2．鏡檢應(yīng)選擇完整、核質(zhì)中顆粒均勻的細胞觀察，X-小體大小約為1μm，多位于細胞核邊緣。
3．統(tǒng)計X-小體陽性率，計數(shù)應(yīng)選300—500個細胞。
五、試劑
1．硫堇染液配方：
①4%硫堇原液：4g硫堇粉末置研缽中以50%乙醇100ml研磨溶解。過濾。
②Michaelies緩沖液：醋酸鈉9.714g，巴比妥鈉14.714g加雙蒸水至500ml。
③硫堇工作液（PH5.7）：0.1N HCl 32ml
Michaelies緩沖液28 ml
4%硫堇原液400ml
2．甲苯胺蘭染液配方：
0.2g甲苯胺蘭粉末溶于100ml雙蒸水中即可。