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GUS染色液使用說(shuō)明書 

【產(chǎn)品組成】

Component	SBJ-0569S 110ml	Store at
試劑(A):GUS Buffer A	50ml	室溫
試劑(B):GUS Buffer B	1ml	4℃,避光
試劑(C):GUS Buffer C	1ml	4℃,避光
試劑(D):2×Fixation Buffer	25ml	室溫,避光
試劑(E):X-GlcA	80mg	-20℃,避光
試劑(F):X-GlcA Solvent	1ml	室溫,避光
試劑(G):Deionized Water	110ml	室溫

【保存條件】

-20℃,避光;4℃,避光,12個(gè)月

【產(chǎn)品概述】

  GUS(β-Galactosidase)基因是存在于E.coli等一些細(xì)菌基因組內(nèi)的編碼β-葡萄糖苷酸酶的一種水解酶，該基因常作為融合標(biāo)記用于植物轉(zhuǎn)基因分析和調(diào)控研究中。GUS受體基因系統(tǒng)有表達(dá)E.coliGUS酶的穩(wěn)定性和在植物內(nèi)的低活性，絕大多數(shù)植物沒(méi)有檢測(cè)到葡萄糖苷酸酶的背景活性，以β-葡萄糖苷酸酯類物質(zhì)為底物，其反應(yīng)產(chǎn)物可用多種方法檢測(cè)出來(lái)。5-Bromo-chloro-3-indolylβ-D-glucuronide，cyclohexylammonium salt(簡(jiǎn)稱為X-Gluc或X-GlcA)分子量為521.8，CAS號(hào)為18656-96-7，是檢測(cè)大腸桿菌中GUS基因的底物，可快速檢測(cè)植物中GUS基因融合標(biāo)記。

  β-葡萄糖苷酶基因染色試劑盒(β-Galactosidase Reporter Gene Staining Kit)簡(jiǎn)稱為GUS染色液，其染色原理是適宜的反應(yīng)條件下β-葡萄糖苷酶(GUS)可將X-Gluc水解成藍(lán)色物質(zhì)，該物質(zhì)不溶解于轉(zhuǎn)基因的細(xì)胞核組織中的靛藍(lán)物質(zhì)，具有GUS活性的部位或位點(diǎn)呈現(xiàn)藍(lán)色或藍(lán)色斑點(diǎn)，可用肉眼或顯微鏡觀察到，GUS染色液可用于生物化學(xué)活性分析、免疫分析以及組織和細(xì)胞的組織化學(xué)染色，多用于轉(zhuǎn)基因植物的GUS基因表達(dá)分析。該試劑僅用于科研領(lǐng)域，不適用于臨床診斷或其他用途。

【使用方法】

1、配制X-GlcA Solution：取X-GlcA Solvent 229μl加入至80mg X-GlcA中或取適量上述2種物質(zhì)溶解，使其濃度達(dá)到350mg/ml，輕輕Vortex混勻，即為Solution，分裝后，-20℃避光保存。

2、按下列比例配制GUS染色液：

組分	體積
GUS Buffer A	2.5ml
GUS Buffer B	40μl
GUS Buffer C	40μl
Deionized Water	5.4ml
甲醇	2ml
X-GlcA Solution	20μl
Tatal volume	～10ml

3、固定(固定不是必須的步驟，如果不需要固定，直接進(jìn)行操作步驟4)：

①取轉(zhuǎn)基因植物組織，入3～5ml清潔小瓶或多孔板中。

②取適量2×Fixation Buffer與去離子水等量稀釋即獲得1×Fixation Buffer，加入1×Fixation Buffer使其*浸沒(méi)組織，室溫孵育45～60min，棄液。

③配制洗滌液：按GUS Buffer A:去離子水=1:20稀釋即為洗滌液，用配制好的洗滌液漂洗3次，每次1min。

4、加入適量GUS染色液，使GUS染色液*浸沒(méi)組織。

5、(備選)用真空泵抽取小瓶或多孔板中的氣體，抽取時(shí)間應(yīng)大于2min；該步驟是非必需步驟，目的是為了抽取植物組織內(nèi)的氣體，并使染色液更容易進(jìn)入組織內(nèi)。

6、立即蓋緊瓶子或多孔板，37℃孵育24h；隨著孵育時(shí)間的延長(zhǎng)，藍(lán)色漸漸出現(xiàn)，當(dāng)表達(dá)量較高時(shí)，GUS活性的部位或位點(diǎn)呈現(xiàn)藍(lán)色或藍(lán)色斑點(diǎn)。

7、用乙醇脫去樣本的葉綠素，一般樣本浸沒(méi)于乙醇1～3h；如有必要可重復(fù)該脫色步驟，以便*清除葉綠素；樣本保存于乙醇中可用肉眼或普通光學(xué)顯微鏡下觀察。

【注意事項(xiàng)】

1、GUS染色液建議冰上配制，可以4℃避光保存3天。

2、減少GUS Buffer B、C的使用量會(huì)提高檢測(cè)特異性(即減少假陽(yáng)性)，但常會(huì)導(dǎo)致無(wú)陽(yáng)性結(jié)果，GUS Buffer B、C的使用量一般控制在4～40μl/10ml。

3、X-GlcA Solution應(yīng)避免反復(fù)凍融，否則染色效率會(huì)下降。

4、由于組織特異性等原因，藍(lán)色顏色反應(yīng)可能不*一致，應(yīng)注意摸索具體實(shí)驗(yàn)條件。