食品機(jī)械設(shè)備網(wǎng)技術(shù)文章
糖化酶的液態(tài)發(fā)酵生產(chǎn)-糖化酶的發(fā)酵
閱讀：357 發(fā)布時(shí)間：2022-11-18糖化酶的液態(tài)發(fā)酵生產(chǎn)
、能力目標(biāo)
①借助相關(guān)材料，能完成糖化酶制劑的液態(tài)發(fā)酵過程的操作。
②理解酶制劑超濾濃縮的原理，并能立完成其操作步驟。
③理解無機(jī)鹽沉淀和有機(jī)溶劑沉淀法提取酶的原理，能立操作其過程。
二、生產(chǎn)工藝流程
糖化酶的液態(tài)發(fā)酵生產(chǎn)工藝流程如圖6-16所示。
斜面培養(yǎng)—獲皮種子——上濾熔養(yǎng)——板抵過法—超濾依——沉淀——泥干燥圖6-16糖化酶的液態(tài)發(fā)酵生產(chǎn)工藝流程
三、實(shí)訓(xùn)材料
1.菌種
黑曲霉UV-11.
2.培養(yǎng)麩
（1）斜面培養(yǎng)基
土豆培養(yǎng)基。
（2）獲皮種子培養(yǎng)基
小麥麩皮與水的比例為1：（1.1~1.3），接種后于30~32℃培養(yǎng)4~5d至長(zhǎng)滿豐富的孢子，中間翻曲。
（3）發(fā)酵培養(yǎng)基
玉米粉13.5%，豆餅粉3.5%，麩皮1.0%，玉米漿2.0%，無機(jī)鹽。
3.實(shí)驗(yàn)儀器與設(shè)備
滅菌鍋、試管、棉塞、培養(yǎng)基原料、培養(yǎng)箱、500mL三角瓶。
251.全自動(dòng)發(fā)酵熊、恒溫培養(yǎng)箱、板框壓濾機(jī)、膜過濾裝置。
四、操作要點(diǎn)
1.種子剖備
固體孢子培養(yǎng)：將10g麩皮和10ml.水拌勻后滅菌30min，冷卻后接入環(huán)斜面菌種，于30~32℃培養(yǎng)4~5d至長(zhǎng)滿豐富的孢子備用，種子罐培養(yǎng)：玉米粉6%，黃豆餅粉2%，麩皮2%。在31℃下通風(fēng)培養(yǎng)32h，通氣比為0.5：1，當(dāng)pH下降到3.8，酶活力在500U/mL左右，鏡檢菌絲生長(zhǎng)正常且無雜菌污染時(shí)，即可接入二種子罐或發(fā)酵罐。
2.251.維發(fā)酵
按配方配制培養(yǎng)基（裝液量15l），調(diào)pH至4.0，加入發(fā)酵罐中，121℃滅落30min，冷卻，待溫度降至30~32℃，接人個(gè)三角瓶的孢子懸液或種子罐培養(yǎng)的種子，在30℃、罐壓0.05MPa下攪拌培養(yǎng)，攪拌速度為500r/min。通氣比：0~12h為0.5：1；12~24
h為0.8：1；24~84h為1.0：1；84h后為0.8：1。
3.發(fā)酵過程監(jiān)控
每隔12h取樣測(cè)定酶活力、pH、還原糖及總糖濃度并作鏡檢。當(dāng)pH降至3.4，還原糖降至1.8%以下，醇活力上升至13600I/ml.以上時(shí)，即可放錯(cuò)。
4.發(fā)酵液過泌
洗凈板框壓濾機(jī)，裝好濾布，接好板框壓濾機(jī)的管道，泵料過濾，加水洗滌，空氣吹干，過濾結(jié)束后洗凈過濾機(jī)及有關(guān)設(shè)備。取濾液體積，取樣測(cè)定糖化酶活力。
5.超濾濃館
取10L糖化酶的濾液加人到超濾裝置的儲(chǔ)罐中，開動(dòng)循環(huán)料液泵進(jìn)行超濾，控制超濾壓力小于0.4MPa。每隔20min用量筒測(cè)量透過液流量，比較透過液流量的變化。
當(dāng)濃縮倍數(shù)達(dá)到3~5倍時(shí)，停止超濾。
測(cè)濃縮液體積，原酶液、濃縮液和透過液的酶活力。
6.有機(jī)溶刻沉淀
取1L濃縮液，用鹽酸調(diào)節(jié)pH至3.5.在10~~20℃條件下加入3.5倍冷凍的*，邊加邊攪拌，即可發(fā)現(xiàn)酶的沉淀現(xiàn)象。沉淀物用布氏漏斗抽濾。稱量酶泥的質(zhì)量，測(cè)定酶活力，
7.無機(jī)鹽沉淀
取1l.濃縮液，按55g/（100ml.）加硫酸銨，靜止鹽析1h。沉淀物用布氏漏斗抽濾。
稱酶泥的質(zhì)量，測(cè)定酶活力。
8.酶泥的干燥
將上述步驟中得到的酶泥放入干燥箱中，在40℃下以熱風(fēng)干燥，將干燥的制品磨粉即得成品。將成品稱量并測(cè)定酶活力。
五、過程檢驗(yàn)及成品酶活力測(cè)定
1.黑曲霉鍵檢
（1）染料
草酸銨結(jié)品紫液（A液：1%結(jié)晶紫加95%酒精溶液；B液：1%草酸銨溶液，取A液20mL，B液80mL混合，靜置48h后使用）。
（2）鏡檢過程
涂片→干燥→固定→染色水洗干燥→鏡檢。
2.總糖的測(cè)定
要林法測(cè)定發(fā)酵液中的總糖。
3.還原糖的測(cè)定
DNS法，參考本書相關(guān)內(nèi)容：
4.樹化酶酶活力的測(cè)定
參考本書相關(guān)內(nèi)容。
5.pH、溶解氧的跟蹤測(cè)定
從二次儀表直接讀取。
六、實(shí)訓(xùn)報(bào)告
寫出書面實(shí)訓(xùn)報(bào)告，并著重分析過程中出現(xiàn)的問題以及解決的辦法。
七、實(shí)訓(xùn)思考題
1.還原糖的測(cè)定除了DNS法還有什么方法？
2.糖化酶固態(tài)發(fā)酵與液態(tài)發(fā)酵的異同有哪些？
模塊七
新型發(fā)酵技術(shù)
項(xiàng)目1固定化細(xì)胞生產(chǎn)技術(shù)