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發(fā)酵過程無菌狀況的檢測

發(fā)酵過程是否染菌應以無菌試驗的結(jié)果作為依據(jù)進行判斷。在發(fā)酵過程中，如何及早發(fā)現(xiàn)雜菌的污染并及時采取措施加以處理，是避免染菌造成嚴重經(jīng)濟損失的重要手段。

目前常用于檢查是否染菌的無菌試驗方法主要有以下幾種：

1.顯微鏡檢查法（鏡檢法）

通常用革蘭氏染色法對樣品進行染色，然后在顯微鏡下觀察微生物的形態(tài)特征，根據(jù)生產(chǎn)菌與雜菌的特征進行區(qū)別，判斷是否染菌。必要時，可進行芽孢染色和鞭毛染色。此法是檢查雜菌簡單、直接、常用的方法。

2.平板劃線培養(yǎng)或斜面培養(yǎng)檢查法

先將制備好的平板置于37C培養(yǎng)箱保溫24h，檢查無菌后將待測樣品在無菌平板上劃線，分別于37C、27℃進行培養(yǎng)，般在8h后即可觀察，連續(xù)3次發(fā)現(xiàn)有異常菌落的出現(xiàn)，即可判斷為染菌。有時為了提高檢測靈敏度，也可將待檢樣品先置于37C培養(yǎng)6~8h，使雜菌迅速增殖后再劃線培養(yǎng)。

噬菌體檢查可采用雙層平板培養(yǎng)法，底層同為肉汁瓊脂培養(yǎng)基，上層減少瓊脂用量。先將滅菌的底層培養(yǎng)基倒平板，待凝固后，將上層培養(yǎng)基熔解并保持40℃，接入生產(chǎn)菌作為指示菌和待測樣品混合后迅速倒入底層平板上，置培養(yǎng)箱中12~20h保溫培養(yǎng)，觀察有無噬菌斑。

3.肉湯培養(yǎng)法

將待檢樣品接入經(jīng)滅菌并經(jīng)過檢查無菌的葡萄糖酚紅肉湯培養(yǎng)基（0.3%牛肉膏，0.5%葡萄糖，0.5%氯化鈉，0.8%蛋白胨，0.4%酚紅溶液，ph7.2）中，于37C和27C分別培養(yǎng)24h，觀察顏色變化（連續(xù)3次由紅色變?yōu)辄S色或產(chǎn)生混濁，可定為染菌），并取樣鏡檢。此法常用于檢查培養(yǎng)基和無菌空氣是否帶菌，也可用于噬菌體檢查，此時使用生產(chǎn)菌作為指示菌。

4.發(fā)酵過程的異常現(xiàn)象觀察法

可根據(jù)發(fā)酵過程出現(xiàn)的異?，F(xiàn)象，如溶解氧、ph、排氣中的CO2含量以及微生物菌體的酶活力等的異常變化來檢查發(fā)酵是否染菌。

特定的發(fā)酵過程具有定的溶解氧水平，而且在不同的發(fā)酵階段，溶解氧的水平也不同，如果發(fā)酵過程中的溶解氧水平發(fā)生了異常變化，般就是發(fā)酵染菌的表現(xiàn)。污染雜菌按照對氧的需求可分為兩類，即好氧菌和非好氧菌。當受到好氧雜菌污染時，溶解氧的變化是在短時間內(nèi)下降，直至為零，且在較長時間內(nèi)不能回升；當受到非好氧雜菌污染時，抑制生產(chǎn)菌的生長，降低溶解氧的消耗，使溶解氧升高。

對于特定的發(fā)酵過程，工藝確定后，排出氣體中的CO2的變化是有規(guī)律的。染菌后，糖耗加快，CO2含量增加；被噬菌體感染后，糖耗降低，CO2的含量隨之降低。因此，可以根據(jù)CO2的含量異常變化來判斷染菌。