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上海光學(xué)儀器六廠
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閱讀:160發(fā)布時間:2024-9-14
熒光顯微鏡
從光源的作用上來看,普通光學(xué)顯微鏡是利用可見光使鏡下標(biāo)本得
到照明,通過放大系統(tǒng)進行觀察,因此,看到的是樣品的本色,光源起
到照明作用;而熒光顯微鏡(fluorescence microscope)則是利用一定
波長的光激發(fā)樣品,使其產(chǎn)生熒光,通過放大系統(tǒng)放大后,看到的不是
樣品的本色,而是其熒光.所以光源起到的是激發(fā)作用,而非照明。由
此看出.熒光顯微鏡的主要特點在于其光源。按激發(fā)光照射的方式.有
透射和落射2種。熒光顯微鏡的結(jié)構(gòu)和主要部件包括以下幾部分。
(1)光源。熒光顯微鏡一般采用200W的超高壓汞燈作為光源.由石
英玻璃制作,超高壓汞燈發(fā)射很強的紫外和藍紫光,足以激發(fā)各類熒光
物質(zhì)。另外超高壓汞燈工作時散發(fā)出大量熱能,因此,燈室必須有良好
的散熱條件。
(2)濾色系統(tǒng)。濾色系統(tǒng)是熒光顯微鏡的重要部件,由激發(fā)濾板和
壓制濾板組成。根據(jù)光源和熒光色素的特點.激發(fā)濾板分為3類:紫外
光激發(fā)濾板、藍光激發(fā)濾板和紫藍光激發(fā)濾板,分別可以提供一定波長
范圍的激發(fā)光。壓制濾板的作用是阻擋激發(fā)光通過,提供相應(yīng)波長
范圍的熒光,與激發(fā)濾板相對應(yīng),有3種壓制濾板:紫外光壓制濾板、
藍光壓制濾板和紫藍光壓制濾板。
(3)反光鏡。反光鏡的反光層一般是鍍鋁的,因為鋁對紫外光和可
見光的藍紫區(qū)吸收少,反射達90%以上(銀的反射只有70%)。一般使用
平面反光鏡。
(4)聚光鏡。專為熒光顯微鏡設(shè)計制作的聚光鏡是用石英玻璃或其
他透紫外光的玻璃制成,分明視野聚光鏡和暗視野聚光鏡2種。
(5)物鏡。各種物鏡均可應(yīng)用.但用消色差的物鏡,因其自體
熒光極微,且透光性
(6)目鏡。在熒光顯微鏡中多用低倍目鏡,如5×和6.3×。過去多
用單筒目鏡,因為其亮度比雙筒目鏡高1倍以上,但目前研究型熒光顯
微鏡多用雙筒目鏡,方便觀察。
(7)落射光裝置。落射熒光顯微鏡還具有落射光裝置,落射光裝置
可使熒光圖像的亮度隨著放大倍數(shù)增大而提高,在放大倍數(shù)高時比透射
光源強,更適用于不透明及半透明標(biāo)本,如厚片、濾膜、菌落、組織培
養(yǎng)標(biāo)本等的直接觀察。近年研制的新型熒光顯微鏡多采用落射
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