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《糧油檢驗(yàn) 油料油脂中黃曲霉毒素B1的測定 熒光定量快速檢測法》行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)征求意見

2023-12-12 15:47:06 來源:儀表網(wǎng) 閱讀量:9736

  國家糧食和物資儲備局組織起草的《糧油檢驗(yàn) 油料油脂中黃曲霉毒素B1的測定 熒光定量快速檢測法》行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)已形成征求意見稿,現(xiàn)向社會公開征求意見,截止日期為2024年2月8日。
 
  黃曲霉毒素是黃曲霉和寄生曲霉等在生長繁殖過程中產(chǎn)生的次生有毒代謝產(chǎn)物,是雙呋喃環(huán)類毒素,其衍生物有約 20 種,主要是 B1、B2、G1、G2、M1、M2 等。黃曲霉毒素被世界衛(wèi)生組織癌癥研究機(jī)構(gòu)劃定為一類天然存在的致癌物,其中以 B1 的毒性最大,致癌性最強(qiáng)。糧食和植物油料均會受到黃曲霉毒素的污染,尤其是花生和玉米更容易被污染。在花生油和玉米油的生產(chǎn)中,原料花生仁和玉米胚中的黃曲霉毒素會轉(zhuǎn)移至花生油、玉米油和花生餅粕、玉米餅粕中,對食用油脂和飼料餅粕的質(zhì)量安全造成威脅。GB 2761-2017《食品安全國家標(biāo)準(zhǔn) 食品中真菌毒素限量》中對花生和玉米胚及其油脂中 AFB1 做出≤20µg/kg 限量要求。
 
  GB 5009.22-2016《食品安全國家標(biāo)準(zhǔn) 食品中黃曲霉毒素 B 族和 G 族的測定》中列出了 5 種檢測方法,即第一法同位素稀釋液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法,第二法高效液相色譜-柱前衍生法,第三法高效液相色譜-柱后衍生法,第四法酶聯(lián)免疫吸附篩查法,第五法為薄層色譜法。其中的高效液相色譜法、酶聯(lián)免疫吸附法以高靈敏度、精密度和便于自動化而被應(yīng)用于油脂企業(yè)。然而,高效液相色譜法檢測成本高,儀器價(jià)格高,維護(hù)費(fèi)用高,分析時(shí)間長,前處理復(fù)雜;酶聯(lián)免疫吸附法雖然在檢測成本上略好,但準(zhǔn)確性和重現(xiàn)性卻有待提高。
 
  近年來,黃曲霉毒素 B1 快速檢測方法已在油脂生產(chǎn)企業(yè)廣泛使用,它具有操作簡單、樣品用量少、測定速度快、重現(xiàn)性好、結(jié)果可靠等特點(diǎn),尤其在油料、油脂、餅粕的日常生產(chǎn)檢驗(yàn),特別是其高密度檢測中顯現(xiàn)更大的優(yōu)勢。并且,黃曲霉毒素 B1 快檢法也已普遍應(yīng)用于糧食和飼料領(lǐng)域,并出臺了多個(gè)行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)和地方標(biāo)準(zhǔn),包括:LS/T 6111-2015 《糧油檢驗(yàn) 糧食中黃曲霉毒素 B1 測定 膠體金快速定量法》,NY/T 2550-2014 《飼料中黃曲霉毒素 B1 的測定 膠體金法》,DB36/T 1024-2018 《飼料中黃曲霉毒素的快速篩查 膠體金快速定量法》。因此,從生產(chǎn)實(shí)際出發(fā),油料油脂領(lǐng)域也需要把黃曲霉毒素 B1 快檢法提升為標(biāo)準(zhǔn)方法,并加以推廣應(yīng)用,為食用植物油生產(chǎn)中 AFB1 實(shí)時(shí)檢測和監(jiān)控提供支持。此外,糧食和飼料所采用的快檢標(biāo)準(zhǔn)方法多為膠體金法,膠體金法只能實(shí)現(xiàn)定性和半定量,而熒光定量法能夠?qū)崿F(xiàn)指標(biāo)定量的快速檢測,能夠更精準(zhǔn)的對黃曲霉毒素進(jìn)行監(jiān)控。因此制定油料油脂生產(chǎn)中黃曲霉毒素 B1 熒光定量快速檢測方法是非常必要的,對可靠監(jiān)控油料油脂生產(chǎn)中黃曲霉毒素 B1 風(fēng)險(xiǎn)、實(shí)現(xiàn)糧油行業(yè)的高質(zhì)量發(fā)展具有重要意義。
 
  本文件按照GB/T 1.1—2020《標(biāo)準(zhǔn)化工作導(dǎo)則 第1部分:標(biāo)準(zhǔn)化文件的結(jié)構(gòu)和起草規(guī)則》的規(guī)定起草。本文件起草單位:河南工業(yè)大學(xué),費(fèi)縣中糧油脂工業(yè)有限公司,中糧油脂控股有限公司,河北玉星食品有限公司,長壽花食品股份有限公司。
 
  本文件規(guī)定了黃曲霉毒素B1的熒光定量快速檢測方法的原理、試劑、儀器設(shè)備及材料、樣品制備、樣品測定、結(jié)果判定和檢測限。本文件適用于花生仁、玉米胚等油料及其油脂和餅粕中黃曲霉毒素B1的快速檢測。
 
  原理:
 
  采用熒光側(cè)向免疫層析方法學(xué)原理,將待測樣品滴加在加樣區(qū),樣品中的黃曲霉毒素B1與結(jié)合墊中的熒光微球標(biāo)記黃曲霉毒素B1抗體結(jié)合并通過毛細(xì)作用向前層析,達(dá)到檢測區(qū)后,檢測線T線上固定的黃曲霉毒素B1抗原與剩余未結(jié)合的熒光微球標(biāo)記黃曲霉毒素B1抗體結(jié)合。檢測線T線上結(jié)合的熒光微球標(biāo)記黃曲霉毒素B1抗體的量與樣品中黃曲霉毒素B1的濃度成反比。層析結(jié)束后,采用熒光定量快速檢測儀讀取T線和C線的熒光強(qiáng)度并計(jì)算T/C值,通過儀器內(nèi)置的標(biāo)準(zhǔn)曲線即可計(jì)算出樣品中黃曲霉毒素B1的含量并判斷陰陽性。
 
  儀器設(shè)備及材料:
 
  實(shí)驗(yàn)室常規(guī)儀器、設(shè)備及材料。
 
  1.粉碎機(jī):可使試樣粉碎后全部通過20目標(biāo)準(zhǔn)篩。
 
  2.天平:分度值 0.01g。
 
  3.漩渦振蕩器。
 
  4.黃曲霉毒素 B1熒光定量快速檢測卡(2):具體儲存條件參照使用說明。
 
  5.離心機(jī)。
 
  6.恒溫孵育器:孵育溫度 37℃,工作條件:環(huán)境溫度 5-37℃,環(huán)境濕度不大于80%。
 
  7.熒光定量快速檢測儀(3):工作條件:環(huán)境溫度 5-40℃,環(huán)境濕度不大于 90%。
 
  8.ID 卡。
 
  9.條形碼。
 
  樣品測定:
 
  1.檢測前準(zhǔn)備
 
  1.1 將待用黃曲霉毒素B1熒光定量快速檢測卡、樣品提取液、樣品稀釋液恢復(fù)至室溫。
 
  1.2 將檢測卡恒溫孵育器開機(jī),待溫度升至37℃后即可使用。
 
  1.3 將熒光定量快速檢測儀開機(jī),預(yù)熱10min,插入本批次產(chǎn)品所對應(yīng)的ID卡(每批次產(chǎn)品只需插一次即可),如需切換檢測項(xiàng)目,掃描相應(yīng)項(xiàng)目和批次的條形碼即可。
 
  2.樣品檢測
 
  2.1 從包裝袋中取出黃曲霉毒素B1熒光定量快速檢測卡,水平置于檢測卡恒溫孵育器上。
 
  2.2 用移液槍吸取稀釋后的待測液100ul加到檢測卡上的加樣孔中,開始計(jì)時(shí)孵育8min。
 
  2.3 孵育結(jié)束后,將檢測卡插入熒光定量快速檢測儀中,按讀數(shù)鍵或觸摸屏幕讀數(shù)即可。
 
  結(jié)果判定:
 
  1.定量檢測結(jié)果將呈現(xiàn)于熒光定量快速檢測儀液晶顯示屏上,同時(shí)可按打印鍵打印獲得紙質(zhì)的檢測報(bào)告(平行測定次數(shù)可根據(jù)使用方質(zhì)量控制要求進(jìn)行調(diào)整,定量檢測結(jié)果保留2位小數(shù))。
 
  2.陰性(-):檢測結(jié)果
 
  3.陽性(+):檢測結(jié)果≥cut-off值(可根據(jù)使用方質(zhì)量控制要求進(jìn)行調(diào)整)。
 
  4.無效:檢測儀報(bào)錯(cuò),則本次檢測無效,需重新測試。
 
  5.檢測結(jié)果超出定量范圍的上限,可取離心后的上清液(6.2.4),用樣品提取液稀釋5倍后混勻,再按(6.2.5)檢測,檢測結(jié)果乘以5,即為樣品中黃曲霉毒素B1的最終含量。
 
  更多詳情請見附件。
 

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