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《海參中海參多糖的測(cè)定 高效液相色譜法》國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)征求意見

2021-10-15 08:54:37 來源：儀表網(wǎng) 閱讀量：8039

　　根據(jù)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)化管理委員會(huì)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)制修訂計(jì)劃，由中國(guó)標(biāo)準(zhǔn)化研究院提出并歸口的《海參中海參多糖的測(cè)定 高效液相色譜法》(計(jì)劃號(hào)：20205073-T-424)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)現(xiàn)已形成征求意見稿，按照《國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)管理辦法》的有關(guān)規(guī)定，現(xiàn)向社會(huì)各界公開征求意見。
 
　　海參(sea cucumber)，屬棘皮動(dòng)物門(Echinodermata)，海參綱(Holothurioider)，是棘皮動(dòng)物中經(jīng)濟(jì)價(jià)值最大的一綱。海參約有 1100 多種，我國(guó)有 100 多種，可供食用的有 20多種，其中以仿刺參的品質(zhì)和口感最佳。海參含有蛋白質(zhì)、多糖、微量元素和維生素等多種營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，已經(jīng)作為功能食品而被引起關(guān)注。更重要的是，它們含有大量的生物活性物質(zhì)如海參皂甙、粘多糖和膠原蛋白等，具有潛在的醫(yī)藥應(yīng)用價(jià)值。
 
　　海參多糖作為主要的活性成分，其含量對(duì)其食用及藥用價(jià)值影響很大，是不可或缺的海參營(yíng)養(yǎng)評(píng)價(jià)指標(biāo)。海參中多糖類化合物結(jié)構(gòu)復(fù)雜，且因海參種類和生長(zhǎng)環(huán)境的不同而有差別。不同種類海參中的多糖結(jié)構(gòu)不同，而不同產(chǎn)地的同種海參中海參巖藻聚糖硫酸酯(SC-FUC)和海參硫酸軟骨素(SC-CHS)的含量也不盡相同。另外，海參中蛋白質(zhì)、多糖、脂肪、微量元素等復(fù)雜成分的存在，會(huì)給海參多糖的測(cè)定帶來很多困難，采用簡(jiǎn)單的分光光度法或稱重法很難滿足以海參多糖為評(píng)價(jià)指標(biāo)建立海參制品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的要求。因此，制訂簡(jiǎn)單可信的海參多糖的檢測(cè)方法標(biāo)準(zhǔn)具有十分重要的現(xiàn)實(shí)意義和緊迫性。
 
　　本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了海參及以海參為原料加工而成的干海參、即食海參、膠囊、漿液等深加工制品中海參多糖含量的高效液相色譜測(cè)定方法的范圍、規(guī)范性引用文件、原理、試劑和材料、儀器和設(shè)備、結(jié)果計(jì)算與表示、精密度。
 
　　本標(biāo)準(zhǔn)適用于海參及以海參為原料加工而成的干海參、即食海參、膠囊、漿液等深加工制品中海參多糖含量的測(cè)定。
 
　　下列文件中的內(nèi)容通過文中的規(guī)范性引用而構(gòu)成本文件不可少的條款。其中，注日期的引用文件，僅該日期對(duì)應(yīng)的版本適用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改單)適用于本文件。GB/T 6682 分析實(shí)驗(yàn)室用水規(guī)格和試驗(yàn)方法；GB/T 8855 水果和蔬菜 取樣方法。
 
　　方法原理：
 
　　樣品經(jīng)酶解、乙酸鉀沉淀、酸解后制備得到海參硫酸軟骨素水解液，水解液中巖藻糖與 1-苯基-3-甲基-5-吡唑啉酮(PMP)進(jìn)行衍生反應(yīng)，XDB-C18 色譜柱分離，經(jīng)配有紫外檢測(cè)器的高效液相色譜儀測(cè)定巖藻糖衍生物的含量，內(nèi)標(biāo)法定量，以巖藻糖含量為基準(zhǔn)計(jì)算出樣品中海參多糖的含量。
 
　　儀器和設(shè)備：
 
　　1.高效液相色譜儀：配紫外檢測(cè)器。2.天平：感量0.01g。3.分析天平：感量0.0001g。4.離心機(jī)：15000 r/min。5.電熱恒溫鼓風(fēng)干燥箱。6.超聲波清洗儀。7.渦旋混合器。8.恒溫水浴鍋。9.恒溫水浴振蕩器。10.氮吹儀。11.pH 計(jì)。12.微量移量移液槍及配套槍頭。13.小型粉碎機(jī)。
 
　　測(cè)定步驟：
 
　　樣品的前處理：
 
　　鮮海參去腸腺、灰嘴，剪成 0.5 cm×0.5 cm 的小塊，70 ℃烘干 12 h，粉碎，過10目篩，混勻備用；干海參，粉碎，過 10 目篩，混勻備用；即食海參，剪成 0.5cm×0.5cm 的小塊，70 ℃烘干 12 h，粉碎，過 10 目篩，混勻備用；膠囊，取內(nèi)容物混勻備用；漿液，混勻備。
 
　　結(jié)果表示：
 
　　測(cè)定結(jié)果以平均測(cè)定的算術(shù)平均值表示，計(jì)算結(jié)果保留兩位有效數(shù)字。兩次平行測(cè)定結(jié)果的相對(duì)平均偏差不應(yīng)超過10%。
 
　　本標(biāo)準(zhǔn)方法的優(yōu)點(diǎn)在于：
 
　　(1)靈敏度高，巖藻糖衍生物在 254 nm 有很強(qiáng)的吸收，濃度為8.0×10-4 mg/mL 時(shí)即可實(shí)現(xiàn)定量檢測(cè)。(2)穩(wěn)定性好，24 小時(shí)內(nèi)巖藻糖衍生物峰面積穩(wěn)定，RSD≤5%。(3)分離效果好，在此高效液相色譜條件下，巖藻糖能夠與其它單糖明顯分離，有效避免其它單糖對(duì)巖藻糖的檢測(cè)帶來的干擾，實(shí)現(xiàn)準(zhǔn)確定量。(4)適用范圍較廣，可應(yīng)用于固態(tài)、液態(tài)等多種刺參制品中海參多糖含量的測(cè)定。(5)本方法能有效排除市場(chǎng)上向刺參制品中摻入其它來源多糖而干擾海參多糖準(zhǔn)確定量的問題。
 

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