BD細(xì)胞凋亡試劑盒AnnexinV-FITC/PI雙染，BD細(xì)胞凋亡試劑盒AnnexinV-FITC/PI雙染，

簡(jiǎn)單介紹：

 在正常細(xì)胞中，***脂酰*只分布在細(xì)胞膜脂質(zhì)雙層的內(nèi)側(cè)，細(xì)胞發(fā)生凋亡zui早期，膜***脂酰*（PS）由脂膜內(nèi)側(cè)翻向外側(cè)，這一變化早于細(xì)胞皺縮、染色質(zhì)濃縮、DN**斷化和細(xì)胞膜的通透性增加等凋亡現(xiàn)象。AnnexinV是一種***脂結(jié)合蛋白，與***脂酰*有高度親和力，故可通過細(xì)胞外側(cè)暴露的***脂酰*與凋亡早期細(xì)胞的胞膜結(jié)合。因此AnnexinV被作為檢測(cè)細(xì)胞早期凋亡的靈敏指標(biāo)之一。***化丙***（Propidium Iodide,PI）是一種核酸染料，它不能透過完整的細(xì)胞膜，但凋亡中晚期的細(xì)胞和死細(xì)胞由于細(xì)胞膜通透性的增加，PI能夠透過細(xì)胞膜而使細(xì)胞核染紅。因此將Annexin V與PI匹配使用，就可以將處于不同凋亡時(shí)期的細(xì)胞區(qū)分開來。

操作步驟：

貼壁細(xì)胞需用0.25%的*消化。注意過度消化可損傷細(xì)胞。在消化時(shí)可加2％的BSA可防止消化過度。如果用含EDTA的*消化時(shí)，注意必須*清除EDTA：在標(biāo)記前用1×PBS或1×bindingbuffer洗滌，清除EDTA，以免殘余的EDTA與Ca2＋螯合，影響Annexin V的結(jié)合。
（1）用去離子水將10×Binding Buffer稀釋成1×Binding Buffer；
（2）細(xì)胞收集。懸浮細(xì)胞收集：離心5分鐘；貼壁細(xì)胞：用不含EDTA的*消化收集后（注：*消化時(shí)間不宜過長(zhǎng)，否則會(huì)影響細(xì)胞膜上***脂酰*與Annexin V-FITC的結(jié)合），于室溫2000rpm離心5～10分鐘，收集細(xì)胞；
（3）細(xì)胞洗滌：用預(yù)冷1×PBS（4℃）重懸細(xì)胞一次，2000rpm離心5～10分鐘，洗滌細(xì)胞；
（4）加入300μL 的1×Binding Buffer 懸浮細(xì)胞；
（5）Annexin V-FITC標(biāo)記：加入5μL的Annexin V-FITC混勻后，避光，室溫孵育15分鐘；
（6）PI標(biāo)記：上機(jī)前5分鐘再加入5μL的PI染色。
（7）上機(jī)前，補(bǔ)加200μL的1×Binding Buffer。

組成成分：

Product code Description
556547         Annexin V-FITC Apoptosis Detection Kit I
Components:
556547a      Annexin V Binding Buffer, 10X conc (51-66121E
556547b      Annexin V-FITC (51-65874X)
556547c      Propidium Iodide Staining Solution(51-66211E)